Fatores pré-analíticos que influenciam a sequenciação de nova geração (NGS): experiência IPO Coimbra

• Autor(a) principal: Moreira, Ana Luísa Vilas Boas Guimarães
• Data de Publicação: 2023
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10400.22/24711
• topic: Sequenciação de nova geração (NGS); Ácido desoxirribonucleico (ADN); Tecido fixado em formol e impregnado em parafina (TFFIP); Fatores pré-analíticos

A Sequenciação de nova geração (Next-generation sequencing (NGS)) refere-se a uma tecnologia de sequenciação de alto rendimento. O uso da NGS especificamente aplicada à caracterização de tumores sólidos, enfrenta desafios significativos devido à natureza dos tecidos disponíveis para análise. O Tecido Fixado em Formol e Impregnado em Parafina (TFFIP) é o método mais utilizado para preservar a morfologia histológica, os ácidos nucleicos e as proteínas para fins de diagnóstico. O objetivo deste trabalho foi a avaliação da influência dos fatores préanalíticos a que os tecidos estão sujeitos no Laboratório de Histologia do Instituto Português de Oncologia de Coimbra (IPOC). Os resultados deste estudo mostraram que a duração de fixação, o tipo de processamento, a área tumoral e o período de arquivo dos blocos de parafina impactam na quantidade e qualidade de ADN recuperado de TFFIP. Desta experiência conclui-se que a duração de fixação dos tecidos não deve ultrapassar os quatro dias. O processamento que menos compromete a quantidade e qualidade de ADN foi aquele em que o agente diafanizador foi o xilol e deve ser utilizada parafina com ponto de fusão que não ultrapasse os 62°C. Efetivamente, os fatores pré-analíticos devem, sem qualquer dúvida, ser bem controlados de modo a garantir que estudos moleculares posteriores não sejam comprometidos.