Estudo dos resíduos de fosforilação da proteína pro-apoptótica BimEL em mitose
Autor(a) principal: | |
---|---|
Data de Publicação: | 2007 |
Tipo de documento: | Dissertação |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos) |
Texto Completo: | http://hdl.handle.net/10451/1183 |
Resumo: | Tese de mestrado em Biologia molecular e genética apresentada à Universidade de Lisboa através da Faculdade de Ciências, 2007 |
id |
RCAP_0199ea694123a3e8103e5e00cd149915 |
---|---|
oai_identifier_str |
oai:repositorio.ul.pt:10451/1183 |
network_acronym_str |
RCAP |
network_name_str |
Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos) |
repository_id_str |
7160 |
spelling |
Estudo dos resíduos de fosforilação da proteína pro-apoptótica BimEL em mitoseBiologia molecularApoptoseMitoseFosforilaçãoTeses de mestradoTese de mestrado em Biologia molecular e genética apresentada à Universidade de Lisboa através da Faculdade de Ciências, 2007Proliferation and cell death are intertwined, highly regulated processes that are extremely important to the homeostasis of living organisms. The machineries of cell cycle and apoptosis, a form of programmed cell death, are known to interact in many ways. However, the proteins involved in the crosstalk between the two pathways during mitosis have only recently started to be identified and studied. One of those proteins is BimEL, a pro-apoptotic member of the Bcl-2 family of proteins. Our group has shown that in mitosis BimEL is phosphorylated and resides in mitochondria, whereas in interphase it is dephosphorylated and sequestered to the microtubules. The phosphorylation of BimEL in mitosis is crucial because it keeps the protein in an inactive state, as it was seen that induction of BimEL dephosphorylation leads to apoptosis. The kinase responsible for this phosphorylation is ERK5, a MAPK family member. However, the aminoacid residues undergoing phosphorylation remain to be identified. One of this project's goals was to identify these residues. In order to do that, some putative BimEL phospho-residues where chosen and mutated into non-phosphorylatable residues. These mutants will latter on be used in in vitro kinase assays aiming to identify the BimEL residues that undergo phosphorylation in mitosis. Another of this project's goals was to create a working model in yeast (Saccharomyces cerevisiae) that would allow us to continue the studies of BimEL's phosphorylation during mitosis. As yeast don't have endogenous BimEL or ERK5, the genes codifying these proteins were cloned into yeast expression plasmids and introduced in yeast cells. The two proteins were expressed and their phosphorylation state in mitosis was investigated. Neither protein was phosphorylated, which means the system needs to be remodelled in order to induce the phosphorylation of BimEL by alternative pathwaysA proliferação e morte celulares são processos interligados e altamente regulados, dada a sua importância na homeostasia dos organismos. São conhecidas diversas vias de interacção entre as maquinarias do ciclo celular e da apoptose, uma forma de morte celular programada. Contudo, só recentemente começaram a ser identificadas e estudadas as proteínas envolvidas na regulação da apoptose durante a mitose. Uma dessas proteínas é a BimEL, um membro pró-apoptótico da família da Bcl-2. Foi demonstrado pelo nosso grupo que em mitose a BimEL se encontra fosforilada e reside nas mitocôndrias, ao passo que em interfase está desfosforilada e sequestrada nos microtúbulos. A fosforilação da BimEL em mitose é crucial para que a proteína permaneça num estado inactivo, uma vez que quando é desfosforilada induz apoptose. A cinase responsável por essa fosforilação é a ERK5, um membro da família das MAPKs. Contudo, os resíduos de aminoácidos que são fosforilados permanecem por identificar. Um dos objectivos deste trabalho foi contribuir para a identificação destes resíduos. Para tal, foram mutados alguns resíduos da BimEL que pelas suas características foram considerados prováveis candidatos a sofrer esta fosforilação. Os mutantes (não fosforiláveis) criados serão utilizados em ensaios de fosforilação in vitro com vista à identificação dos resíduos de fosforilação da BimEL em mitose. Outro objectivo deste trabalho consistiu na criação de um sistema na levedura Saccharomyces cerevisiae que permitisse prosseguir o estudo da fosforilação da BimEL em mitose. Uma vez que este organismo não possui BimEL nem ERK5 endógenas, os genes que codificam para estas proteínas foram clonados em plasmídeos de expressão e introduzidos na levedura. As duas proteínas foram expressas e o seu estado de fosforilação em mitose foi avaliado. Verificou-se que nenhuma se encontrava fosforilada, pelo que será necessário remodelar o sistema, recoChatterjee, SukalyanMalhó, Rui, 1967-Repositório da Universidade de LisboaSantos, Daniela Vanessa Moutinho dos, 1984-2010-07-27T08:55:20Z20072007-01-01T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfapplication/pdftext/xmlhttp://hdl.handle.net/10451/1183porinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)instname:Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãoinstacron:RCAAP2023-11-08T15:40:30Zoai:repositorio.ul.pt:10451/1183Portal AgregadorONGhttps://www.rcaap.pt/oai/openaireopendoar:71602024-03-19T21:27:51.170351Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos) - Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãofalse |
dc.title.none.fl_str_mv |
Estudo dos resíduos de fosforilação da proteína pro-apoptótica BimEL em mitose |
title |
Estudo dos resíduos de fosforilação da proteína pro-apoptótica BimEL em mitose |
spellingShingle |
Estudo dos resíduos de fosforilação da proteína pro-apoptótica BimEL em mitose Santos, Daniela Vanessa Moutinho dos, 1984- Biologia molecular Apoptose Mitose Fosforilação Teses de mestrado |
title_short |
Estudo dos resíduos de fosforilação da proteína pro-apoptótica BimEL em mitose |
title_full |
Estudo dos resíduos de fosforilação da proteína pro-apoptótica BimEL em mitose |
title_fullStr |
Estudo dos resíduos de fosforilação da proteína pro-apoptótica BimEL em mitose |
title_full_unstemmed |
Estudo dos resíduos de fosforilação da proteína pro-apoptótica BimEL em mitose |
title_sort |
Estudo dos resíduos de fosforilação da proteína pro-apoptótica BimEL em mitose |
author |
Santos, Daniela Vanessa Moutinho dos, 1984- |
author_facet |
Santos, Daniela Vanessa Moutinho dos, 1984- |
author_role |
author |
dc.contributor.none.fl_str_mv |
Chatterjee, Sukalyan Malhó, Rui, 1967- Repositório da Universidade de Lisboa |
dc.contributor.author.fl_str_mv |
Santos, Daniela Vanessa Moutinho dos, 1984- |
dc.subject.por.fl_str_mv |
Biologia molecular Apoptose Mitose Fosforilação Teses de mestrado |
topic |
Biologia molecular Apoptose Mitose Fosforilação Teses de mestrado |
description |
Tese de mestrado em Biologia molecular e genética apresentada à Universidade de Lisboa através da Faculdade de Ciências, 2007 |
publishDate |
2007 |
dc.date.none.fl_str_mv |
2007 2007-01-01T00:00:00Z 2010-07-27T08:55:20Z |
dc.type.status.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/publishedVersion |
dc.type.driver.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/masterThesis |
format |
masterThesis |
status_str |
publishedVersion |
dc.identifier.uri.fl_str_mv |
http://hdl.handle.net/10451/1183 |
url |
http://hdl.handle.net/10451/1183 |
dc.language.iso.fl_str_mv |
por |
language |
por |
dc.rights.driver.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/openAccess |
eu_rights_str_mv |
openAccess |
dc.format.none.fl_str_mv |
application/pdf application/pdf text/xml |
dc.source.none.fl_str_mv |
reponame:Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos) instname:Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informação instacron:RCAAP |
instname_str |
Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informação |
instacron_str |
RCAAP |
institution |
RCAAP |
reponame_str |
Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos) |
collection |
Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos) |
repository.name.fl_str_mv |
Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos) - Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informação |
repository.mail.fl_str_mv |
|
_version_ |
1799134161284366336 |