Disseminação de determinantes genéticos de resistência em isolados clínicos de três unidades hospitalares de Lisboa

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Costa, Joana Filipa Cerqueira, 1990-
Data de Publicação: 2013
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
Texto Completo: http://hdl.handle.net/10451/9640
Resumo: Tese de mestrado. Biologia (Microbiologia Aplicada). Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências, 2013
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spelling Disseminação de determinantes genéticos de resistência em isolados clínicos de três unidades hospitalares de LisboaInfecções hospitalaresResistência aos antibióticosEscherichia coliKlebsiella pneumoniaeTeses de mestrado - 2013Tese de mestrado. Biologia (Microbiologia Aplicada). Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências, 2013A ocorrência de infeções causadas por bactérias resistentes aos antibióticos β-lactâmicos tem aumentado significativamente nos últimos anos em bactérias da família Enterobacteriaceae, principalmente em algumas espécies como Escherichia coli e Klebsiella pneumoniae. Estas infeções são particularmente preocupantes em ambiente hospitalar, onde se encontram indivíduos mais suscetíveis à infeção. Este estudo teve como principal objetivo compreender os mecanismos envolvidos na disseminação de estirpes bacterianas multirresistentes e identificar possíveis reservatórios que permitem a perpetuação das mesmas em ambiente hospitalar. O estudo incidiu principalmente sobre 26 isolados de K. pneumoniae e 7 isolados E. coli provenientes de diferentes amostras recolhidas de doentes de três unidades hospitalares de Lisboa que englobam o Centro Hospitalar de Lisboa Ocidental (CHLO). Determinou-se o perfil de suscetibilidade dos isolados aos antibióticos, genes de resistência e ambiente genético dos mesmos, estabeleceu-se uma relação clonal entre os isolados por determinação da sequence type (ST), e estudaram-se os mecanismos envolvidos na transferência horizontal de genes através de técnicas de transferência genética como conjugação e transformação por eletroporação. Entre os isolados de E. coli, 4 eram produtores de uma carbapenemase KPC-2, variante mais comum entre as enzimas da família KPC, frequentemente associadas a isolados de K. pneumoniae. Este gene de resistência foi identificado num plasmídeo de aproximadamente 9 kb pertencente ao grupo de incompatibilidade IncF que foi transferido por eletroporação para a estirpe de E. coli JM109, demonstrando o papel deste plasmídeo na disseminação do gene de resistência blaKPC-2. Foi também identificada a sequência de inserção ISKpn6 a jusante do gene blaKPC-2, sequência que faz parte de um transposão Tn4401 associado à disseminação mundial destes genes. Verificou-se ainda que estes isolados pertencem à ST131, clone pandémico de E. coli descrito como sendo responsável pela disseminação da enzima CTX-M-15. Dos isolados de K. pneumoniae estudados, 19 eram produtores de uma β-lactamase de espectro alargado CTX-M-15, a β-lactamase de espectro alargado (ESBL) mais disseminada em todo o mundo. Dos 6 isolados para os quais se determinou a ST, identificou-se a ST15 em 5 isolados, um dos STs mais prevalentes em K. pneumoniae produtoras de enzimas da família CTX-M. Identificaram-se ainda as sequências de inserção ISEcp1 e IS903 a montante e a jusante do gene blaCTX-M-15, respetivamente, sequências que desempenham um papel importante na mobilização deste gene. Este estudo demonstrou a existência de disseminação intra- e inter-hospitalar de organismos produtores de ESBLs que pode ser explicada pela facilidade de aquisição de elementos genéticos móveis contendo os genes de resistência e pela sua propagação em clones específicos. Torna-se urgente a implementação de medidas de controlo e prevenção de disseminação destes organismos.The occurrence of infections caused by resistant bacteria to β-lactam antibiotics has increased significantly in recent years in Enterobacteriaceae, especially in some species such as Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae. These infections are of particular concern in hospitals, where patients are more susceptible to infections. The aim of this study was to understand the mechanisms involved in the spread of multiresistant bacterial strains and identify possible reservoirs that allow their perpetuation in the hospitals. The study focused mainly on 26 isolates of K. pneumoniae and 7 isolates of E. coli isolated from different samples collected from patients in three hospitals in Lisbon comprising the Centro Hospitalar de Lisboa Ocidental (CHLO). The antibiotic susceptibility profile of the isolates was determined as well as the resistance genes and their genetic environment. A clonal relationship was established among the isolates by the determination of the sequence type (ST). The mechanisms involved in the horizontal transfer of resistance genes were studied by conjugation and electroporation techniques. Among the E. coli isolates, 4 were KPC-2 producers, the most common variant among the KPC enzymes family, often associated with K. pneumoniae isolates. The plasmid size was approximately 9 kb and it belongs to the IncF incompatibility group. This plasmid was transferred by electroporation into the E. coli JM109 strain, demonstrating the role of this plasmid in the spread of the blaKPC-2 gene. The insertion sequence ISKpn6 downstream the blaKPC-2 gene was also identified. This insertion sequence is part of the transposon Tn4401 associated with the worldwide spread of the blaKPC genes. These isolates belong to ST131, an E. coli pandemic clone described as being responsible for the spread of the CTX-M-15 enzymes. Among the K. pneumoniae isolates, 19 produced the extended spectrum β-lactamase CTX-M-15, the most widespread extended spectrum β-lactamase (ESBL) worldwide. The ST was determined in 6 isolates of which 5 isolates belong to ST15, one of the most prevalent STs in K. pneumoniae CTX-M-producers. The insertion sequences ISEcp1 and IS903 were also indentified upstream and downstream of the blaCTX-M-15 gene, respectively. These sequences play an important role in the mobilization of these genes. This study demonstrated an intra- and inter-hospital dissemination of ESBL-producing organisms that can be explained by the facility of acquisition of mobile genetic elements containing the resistance genes and its propagation in specific clones. It is necessary to implement measures to control and prevent the spread of these organisms.Duarte, Aida, 1948-Reis, Ana Maria Gonçalves, 1958-Repositório da Universidade de LisboaCosta, Joana Filipa Cerqueira, 1990-2013-12-05T18:30:45Z20132013-01-01T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfhttp://hdl.handle.net/10451/9640TID:201291061porinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)instname:Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãoinstacron:RCAAP2023-11-08T15:54:11Zoai:repositorio.ul.pt:10451/9640Portal AgregadorONGhttps://www.rcaap.pt/oai/openaireopendoar:71602024-03-19T21:33:47.418444Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos) - Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãofalse
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