Desenvolvimento de um sistema de cultura in vitro de células lúteas bovinas para estudar as interacções com embriões em co-cultura

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Batista, Mariana Raposo
Data de Publicação: 2011
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
Texto Completo: http://hdl.handle.net/10400.5/4325
Resumo: Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina Veterinária
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spelling Desenvolvimento de um sistema de cultura in vitro de células lúteas bovinas para estudar as interacções com embriões em co-culturaCélulas lúteasCultura in vitroEmbriãoco-culturaProgesteronaBovinoluteal cellsin vitro cultureembryoco-cultureprogesteronebovineDissertação de Mestrado Integrado em Medicina VeterináriaO objectivo deste trabalho foi o desenvolvimento de um sistema de cultura in vitro de células lúteas bovinas, compatível com o sistema de cultura in vitro de embriões bovinos, para estudar as suas interacções, relevantes para o estabelecimento da gestação nos mamíferos. As células foram obtidas pela digestão de corpos lúteos (CL) pela colagenase, seguida de centrifugações em gradiente de Percoll® e centrifugações a velocidades decrescentes. Foram estudados os efeitos do estadio do CL do qual provêem as células lúteas, meio de cultura, concentração de soro no meio de cultura, tensão de oxigénio na atmosfera de cultura, criopreservação e cobertura da cultura com óleo mineral sobre a produção de progesterona (P4) pelas células lúteas em cultura. A P4 foi quantificada por radioimunoensaio. Verificou-se que o estadio do CL teve efeito significativo na P4 produzida, assim como a refrescagem do meio para as células provenientes do estadio early. Não se verificaram efeitos significativos dos restantes factores estudados. O óleo reduz cerca de 50× a P4 quantificada no meio. O sistema de cultura in vitro aqui desenvolvido apresenta as condições requeridas para a co-cultura de embriões.ABSTRACT - Development of an in vitro culture system for bovine luteal cells which allow the study of embryo interactions in co-culture - The objective of this work was to develop an in vitro culture system for bovine luteal cells, compatible with embryo in vitro culture systems, to allow the study of their interactions, which are relevant for the establishment of mammalian pregnancy. The cells were obtained by collagenase digestion of the corpus luteum (CL), followed by Percoll® gradient centrifuges and decreasing speed centrifuges. The effects of the stage of the CL of origin, culture medium, serum concentration in the culture medium, oxygen tension in the culture atmosphere, cryopreservation and mineral oil overlaying of the culture wells were evaluated on the luteal cells’ ability to produce progesterone (P4). P4 was quantified by radioimmunoassay. From the above, the effects of the stage of the CL and of the refreshing of the culture medium in the cells of the early CL were significant. Oil overlaying reduced about 50× the P4 quantified in the medium. The luteal cell in vitro culture system here developed is able to support the required conditions for embryo co-culture sessions.Universidade Técnica de Lisboa. Faculdade de Medicina VeterináriaCosta, Luís Filipe Lopes daRepositório da Universidade de LisboaBatista, Mariana Raposo2012-05-04T09:29:07Z2011-12-282011-12-28T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfhttp://hdl.handle.net/10400.5/4325porBATISTA, M. R. (2011). Desenvolvimento de um sistema de cultura in vitro de células lúteas bovinas para estudar as interacções com embriões em co-cultura. Dissertação de Mestrado. Universidade Técnica de Lisboa, Faculdade de Medicina Veterinária, Lisboa.info:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)instname:Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãoinstacron:RCAAP2023-03-06T14:35:19Zoai:www.repository.utl.pt:10400.5/4325Portal AgregadorONGhttps://www.rcaap.pt/oai/openaireopendoar:71602024-03-19T16:52:00.777276Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos) - Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãofalse
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