Sistemas Multiplex para a deteção e caracterização molecular de infeções

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Ramos, Elisabete Manuela de Sousa
Data de Publicação: 2012
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
Texto Completo: http://hdl.handle.net/10284/3575
Resumo: Trabalho apresentado à Universidade Fernando Pessoa como parte dos requisitos para obtenção do grau de Mestre em Ciências Farmacêuticas
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spelling Sistemas Multiplex para a deteção e caracterização molecular de infeçõesAgentes patogénicosPCR-em-tempo-realPCR MultiplexMicrochipsX-MapSequenciaçãoSistemas MultiplexPathogen agentsReal-time PCRMultiplex PCRMicrochipsX-MapSequencingMultiplex systemsTrabalho apresentado à Universidade Fernando Pessoa como parte dos requisitos para obtenção do grau de Mestre em Ciências FarmacêuticasAtualmente existe uma enorme preocupação em estudar os microrganismos, em particular os patogénicos para o Homem, uma vez que a sua presença no organismo constitui um risco potencial para a saúde Humana. Por este motivo, nos últimos 10-20 anos, temos assistido a uma evolução significativa nas técnicas disponíveis para a identificação laboratorial dos agentes responsáveis por patologias de base infeciosa. Os novos métodos, especialmente os baseados na tecnologia dos ácidos nucleicos, apresentam enormes vantagens em termos de sensibilidade, especificidade e grande rapidez na obtenção de resultados. Por este motivo, têm sido cada vez mais utilizados na deteção e identificação de microrganismos com interesse diagnóstico, prognóstico e de orientação do tratamento. Diversas tecnologias moleculares são utilizadas em laboratório para detetar agentes patogénicos. As mais utilizadas dependem de plataformas de PCR, e mais recentemente de PCR-em-tempo-real, disponibilizando sensibilidade, especificidade e rapidez sem precedentes na história da microbiologia e virologia clínica. No entanto a elevada especificidade destas técnicas podem também constituir uma desvantagem em situações clínicas que possam ter etiologias associadas a um largo espetro de microrganismos. Por este motivo têm sido desenvolvidas estratégias moleculares para detetar simultaneamente múltiplos agentes: os designados Sistemas Multiplex. O primeiro destes sistemas a ser desenvolvido foi o PCR Multiplex o qual permite detetar e amplificar simultaneamente mais do que um organismo identificando assim o agente etiológico. Mais recentemente têm sido desenvolvidos outros métodos multiplex com o mesmo fim: Técnicas baseadas em Microchips (de hibridização ou de amplificação as quais permitem a deteção e identificação de até milhares de sequências e consequentemente centenas a milhares de agentes patogénicos em simultâneo) bem comos sistemas baseados na tecnologia X-Map (fusão da citometria de fluxo e hibridização em solução com partículas fluorescentes). Do mesmo modo, os sistemas baseados na amplificação e sequenciação do gene rRNA 16S permitem a deteção e identificação de praticamente qualquer bactéria patogénica, sem necessitar de qualquer suspeita prévia. Finalmente, o advento das técnicas de sequenciação de 2ª e 3ª geração permitiu o desenvolvimento de uma nova área científica: a Metagenómica, a qual procura caracterizar simultaneamente e completamente a composição microbiológica de ecossistemas complexos, sejam eles humanos (pele, urina, fezes, boca, etc) ou ambientais (ar, águas residuais, solo, etc). Atualmente existe uma enorme preocupação em estudar os microrganismos, em particular os patogénicos para o Homem, uma vez que a sua presença no organismo constitui um risco potencial para a saúde Humana. Por este motivo, nos últimos 10-20 anos, temos assistido a uma evolução significativa nas técnicas disponíveis para a identificação laboratorial dos agentes responsáveis por patologias de base infeciosa. Os novos métodos, especialmente os baseados na tecnologia dos ácidos nucleicos, apresentam enormes vantagens em termos de sensibilidade, especificidade e grande rapidez na obtenção de resultados. Por este motivo, têm sido cada vez mais utilizados na deteção e identificação de microrganismos com interesse diagnóstico, prognóstico e de orientação do tratamento. Diversas tecnologias moleculares são utilizadas em laboratório para detetar agentes patogénicos. As mais utilizadas dependem de plataformas de PCR, e mais recentemente de PCR-em-tempo-real, disponibilizando sensibilidade, especificidade e rapidez sem precedentes na história da microbiologia e virologia clínica. No entanto a elevada especificidade destas técnicas podem também constituir uma desvantagem em situações clínicas que possam ter etiologias associadas a um largo espetro de microrganismos. Por este motivo têm sido desenvolvidas estratégias moleculares para detetar simultaneamente múltiplos agentes: os designados Sistemas Multiplex. O primeiro destes sistemas a ser desenvolvido foi o PCR Multiplex o qual permite detetar e amplificar simultaneamente mais do que um organismo identificando assim o agente etiológico. Mais recentemente têm sido desenvolvidos outros métodos multiplex com o mesmo fim: Técnicas baseadas em Microchips (de hibridização ou de amplificação as quais permitem a deteção e identificação de até milhares de sequências e consequentemente centenas a milhares de agentes patogénicos em simultâneo) bem comos sistemas baseados na tecnologia X-Map (fusão da citometria de fluxo e hibridização em solução com partículas fluorescentes). Do mesmo modo, os sistemas baseados na amplificação e sequenciação do gene rRNA 16S permitem a deteção e identificação de praticamente qualquer bactéria patogénica, sem necessitar de qualquer suspeita prévia. Finalmente, o advento das técnicas de sequenciação de 2ª e 3ª geração permitiu o desenvolvimento de uma nova área científica: a Metagenómica, a qual procura caracterizar simultaneamente e completamente a composição microbiológica de ecossistemas complexos, sejam eles humanos (pele, urina, fezes, boca, etc) ou ambientais (ar, águas residuais, solo, etc).[s.n.]Cabeda, José ManuelRepositório Institucional da Universidade Fernando PessoaRamos, Elisabete Manuela de Sousa2013-01-09T11:12:52Z20122012-01-01T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfhttp://hdl.handle.net/10284/3575TID:202663027porinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)instname:Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãoinstacron:RCAAP2024-01-23T02:02:43Zoai:bdigital.ufp.pt:10284/3575Portal AgregadorONGhttps://www.rcaap.pt/oai/openaireopendoar:71602024-03-19T15:40:29.647971Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos) - Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãofalse
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