Feline hemoplasmas : evaluation of specific antibodies and the molecular and cytological diagnostic

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Catarino, Patrícia Pacheco Nobre Pina
Data de Publicação: 2019
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: eng
Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
Texto Completo: http://hdl.handle.net/10400.5/19013
Resumo: Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina Veterinária
id RCAP_11318c46959a9db06326446424a2bbc8
oai_identifier_str oai:www.repository.utl.pt:10400.5/19013
network_acronym_str RCAP
network_name_str Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
repository_id_str 7160
spelling Feline hemoplasmas : evaluation of specific antibodies and the molecular and cytological diagnosticMycoplasma haemofelisCandidatus Mycoplasma haemominutumCandidatus Mycoplasma turicensisHemoplasmasquantitative PCRrELISAPCR quantitativoDissertação de Mestrado Integrado em Medicina VeterináriaMycoplasma haemofelis, Candidatus Mycoplasma haemominutum and Candidatus Mycoplasma turicensis are three hemoplasmas responsible for feline hemolytic anemias. The diagnosis of the infection can be performed by observation of the agents on blood smears or by their identification and quantification using PCR techniques, presently considered the gold standard method. A recombinant antigen for Mhf (rDnaK) has been identified, characterized, produced and then successfully applied in Western blot and ELISA assays (rELISA) to detect antibodies in samples from experimentally induced infections. To evaluate this application under field conditions, this rELISA was used in samples collected from naturally infected cats, in parallel with quantitative PCR and cytologic examination. Within the scope of the TNR program implemented by the Lisbon City Council, blood samples were collected from 104 cats. After sample collection, blood was immediately used to prepare blood smears which were then stained with Giemsa (Parasitology Lab, FMV/Lisbon University). The remaining blood was split into two aliquots: 1 – Plasma separation, shipped to Vetsuisse Faculty, Zurich University, for antibody testing with rELISA; 2 – Total DNA extraction for identification and quantification of the three species of hemoplasma using qPCR (Virology Lab, FMV/Lisbon University). Out of 22.1% (N=23) samples where the microorganism was identified by qPCR, mycoplasmas were also identified on the blood smears of 15.4% (N=16). 4.8% (N=5) of samples tested as seropositive and 2.9% (N=3) revealed bordeline results. From 77.9% (N=81) of samples that were negative by qPCR, only 44.2% (N=46) were also negative on cytologic examination. 60.6% (N=63) of samples were considered seronegative and 6.7% (N=7) were borderline. Sensitivity for cytology was 69.6% and specificity was 56.8%. Sensibility of rELISA was 25% and its specificity was 85.1%. Cohen’s Kappa (k) was calculated to assess agreement between PCR-Cytology (k=0.1836) and PCR-rELISA (k=0.1093). Given the low agreement, PCR was found to be the most appropriate diagnostic method. Further studies are necessary to characterize the response of the immune system and the role of different antigens in these infections in order to improve the suitability of rELISA in a clinical settingRESUMO - HEMOPLASMAS FELINOS: AVALIAÇÃO DE ANTICORPOS ESPECÍFICOS E CORRESPONDÊNCIA COM O DIAGNÓSTICO MOLECULAR E CITOLÓGICO - Mycoplasma haemofelis, Candidatus Mycoplasma haemominutum e Candidatus Mycoplasma turicensis são três hemoplasmas responsáveis por anemias hemolíticas em felinos. O diagnóstico desta infecção pode ser feito pela observação dos agentes em esfregaços de sangue ou através da sua identificação e quantificação pelas técnicas de PCR, sendo este ultimo considerado o método gold standard. Um antigénio recombinante do Mhf (rDnaK) foi identificado, caracterizado, produzido e posteriormente aplicado com sucesso, em técnicas de Western blot e rELISA, para a deteção de anticorpos em amostras colhidas de gatos infetados experimentalmente. De forma a avaliar a sua aplicação numa realidade clínica, esta rELISA foi utilizada em amostras colhidas de gatos naturalmente infectados, em paralelo com o PCR quantitativo e com o exame citológico. No âmbito do programa CED efetuado pela Câmara Municipal de Lisboa, foi realizada a recolha de sangue a 104 gatos. Após a colheita das amostras, o sangue foi utilizado para preparar esfregaços, corados de seguida com coloração Giemsa (Laboratório de Parasitologia, FMV/ULisboa), e dividido em duas alíquotas: 1- Separação do plasma, que foi enviado para a Faculdade Vetsuisse, Universidade de Zurique, onde realizaram a pesquisa de anticorpos com a rELISA; 2 – Extracção do ADN total para a identificação e quantificação das três espécies de hemoplasmas por qPCR (Laboratório de Virologia, FMV/ULisboa). Das 23 (22.1%) amostras PCR positivas, foram igualmente encontrados micoplasmas em 16 esfregaços (15.4%). 5 (4.8%) amostras foram consideradas seropositivas e 3 (2.9%) apresentaram resultados inconclusivos. Das 81 (77.9%) amostras negativas ao PCR, apenas 46 (44.2%) mostraram-se negativas ao exame citológico. 63 (60.6%) amostras foram consideradas seronegativas e 7 (6.7%) apresentaram valores não conclusivos. A sensibilidade da citologia foi de 69.6% e a especificidade foi de 56.8%. Por sua vez, a rELISA apresentou uma sensibilidade de 25% e uma especificidade de 85.1%. O Cohen’s Kappa (k) foi calculado para avaliar a concordância entre o PCR e a Citologia (k=0.1836) e o PCR e a rELISA (k=0.1093). Tendo em conta as baixas concordâncias, o nosso estudo confirma que o PCR é o método de diagnóstico mais adequado. Mais estudos são necessários para caracterizar a resposta imunitária e o papel dos vários antigénios destes agentes, de forma a melhorar a sua aplicação no rELISA e esta poder ser usada no contexto clínico.Universidade de Lisboa, Faculdade de Medicina VeterináriaDuarte, Ana Isabel Simões PereiraMeireles, José Augusto Farraia e SilvaRepositório da Universidade de LisboaCatarino, Patrícia Pacheco Nobre Pina2019-12-11T14:46:42Z2019-11-052019-11-05T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfhttp://hdl.handle.net/10400.5/19013TID:202375056engCatarino PPNP 2019. Feline hemoplasmas: evaluation of specific antibodies and the molecular and cytological diagnostic. [dissertação de mestrado]. Lisboa: FMV-Universidade de Lisboa.info:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)instname:Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãoinstacron:RCAAP2023-03-06T14:48:32Zoai:www.repository.utl.pt:10400.5/19013Portal AgregadorONGhttps://www.rcaap.pt/oai/openaireopendoar:71602024-03-19T17:03:58.276614Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos) - Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãofalse
dc.title.none.fl_str_mv Feline hemoplasmas : evaluation of specific antibodies and the molecular and cytological diagnostic
title Feline hemoplasmas : evaluation of specific antibodies and the molecular and cytological diagnostic
spellingShingle Feline hemoplasmas : evaluation of specific antibodies and the molecular and cytological diagnostic
Catarino, Patrícia Pacheco Nobre Pina
Mycoplasma haemofelis
Candidatus Mycoplasma haemominutum
Candidatus Mycoplasma turicensis
Hemoplasmas
quantitative PCR
rELISA
PCR quantitativo
title_short Feline hemoplasmas : evaluation of specific antibodies and the molecular and cytological diagnostic
title_full Feline hemoplasmas : evaluation of specific antibodies and the molecular and cytological diagnostic
title_fullStr Feline hemoplasmas : evaluation of specific antibodies and the molecular and cytological diagnostic
title_full_unstemmed Feline hemoplasmas : evaluation of specific antibodies and the molecular and cytological diagnostic
title_sort Feline hemoplasmas : evaluation of specific antibodies and the molecular and cytological diagnostic
author Catarino, Patrícia Pacheco Nobre Pina
author_facet Catarino, Patrícia Pacheco Nobre Pina
author_role author
dc.contributor.none.fl_str_mv Duarte, Ana Isabel Simões Pereira
Meireles, José Augusto Farraia e Silva
Repositório da Universidade de Lisboa
dc.contributor.author.fl_str_mv Catarino, Patrícia Pacheco Nobre Pina
dc.subject.por.fl_str_mv Mycoplasma haemofelis
Candidatus Mycoplasma haemominutum
Candidatus Mycoplasma turicensis
Hemoplasmas
quantitative PCR
rELISA
PCR quantitativo
topic Mycoplasma haemofelis
Candidatus Mycoplasma haemominutum
Candidatus Mycoplasma turicensis
Hemoplasmas
quantitative PCR
rELISA
PCR quantitativo
description Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina Veterinária
publishDate 2019
dc.date.none.fl_str_mv 2019-12-11T14:46:42Z
2019-11-05
2019-11-05T00:00:00Z
dc.type.status.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/publishedVersion
dc.type.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/masterThesis
format masterThesis
status_str publishedVersion
dc.identifier.uri.fl_str_mv http://hdl.handle.net/10400.5/19013
TID:202375056
url http://hdl.handle.net/10400.5/19013
identifier_str_mv TID:202375056
dc.language.iso.fl_str_mv eng
language eng
dc.relation.none.fl_str_mv Catarino PPNP 2019. Feline hemoplasmas: evaluation of specific antibodies and the molecular and cytological diagnostic. [dissertação de mestrado]. Lisboa: FMV-Universidade de Lisboa.
dc.rights.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/openAccess
eu_rights_str_mv openAccess
dc.format.none.fl_str_mv application/pdf
dc.publisher.none.fl_str_mv Universidade de Lisboa, Faculdade de Medicina Veterinária
publisher.none.fl_str_mv Universidade de Lisboa, Faculdade de Medicina Veterinária
dc.source.none.fl_str_mv reponame:Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
instname:Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informação
instacron:RCAAP
instname_str Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informação
instacron_str RCAAP
institution RCAAP
reponame_str Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
collection Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
repository.name.fl_str_mv Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos) - Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informação
repository.mail.fl_str_mv
_version_ 1817552102702972928

Registros relacionados