Estudo de biomarcadores da doença de Niemann-Pick tipo C

• Autor(a) principal: Almeida, Filipe Jorge Sales
• Data de Publicação: 2019
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10400.22/13954
• topic: Niemann-Pick tipo C; Spectrometria de massa; Lisoesfingomielina; Deficiência em esfingomielase ácida; 509

A doença de Niemann-Pick tipo C (NPC) é uma patologia neurodegenerativa progressiva e transmissão autossómica recessiva. É classificada como uma doença rara apresentando uma prevalência estimada de 1 por cada 100000 nados vivos. A doença de NPC é caracterizada por uma acumulação de colesterol e vários esfingolípidos no cérebro e nos órgãos viscerais, devido à perda funcional das proteínas NPC1 e/ou NPC2 envolvidas no tráfego de colesterol. Esta acumulação de colesterol constitui o hallmark patognomónico da doença. A heterogeneidade clínica, associada a sinais e sintomas não específicos e que se sobrepõem com outras patologias, dificultam o diagnóstico, podendo levar a um longo atraso entre a apresentação dos sintomas iniciais e a confirmação laboratorial. Até muito recentemente, o diagnóstico bioquímico desta patologia era efetuado com recurso à coloração de filipina. Apesar de durante muito tempo ter sido considerado gold standard para o diagnóstico de NPC, este ensaio apresenta limitações: i) implica uma colheita invasiva, pois pressupõe a realização de uma biópsia de pele; ii) morosidade, implica o tempo de cultura da biópsia; iii) tecnicamente exigente; iv) é um método qualitativo e pouco específico. O diagnóstico é posteriormente confirmado pela identificação de variantes patogénicas nos genes NPC1 e NPC2. Recentemente, e baseado na acumulação de lípidos que ocorre nesta patologia, nomeadamente esteróis, esfingolípidos e lisoesfingolípidos, têm sido desenvolvidas novas abordagens de diagnóstico. Este trabalho teve como objetivo primário a implementação de um teste rápido, quantitativo, sensível e robusto que permitisse o estudo dos biomarcadores Lisoesfingomielina (LysoSM) e do seu análogo carboxilado, Lisoesfingomielina-509 (LysoSM-509), recorrendo ao método de cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massa em tandem, LC-MS/MS. O estudo destes biomarcadores permitiu implementar um método complementar de diagnóstico para os doentes de NPC, além de permitir discriminá-los dos doentes com deficiência em Esfingomielinase Ácida (ASMD). Este método passou a ser utilizado como método de rastreio de primeira linha para estas duas patologias, ultrapassando essencialmente as limitações dos tradicionais testes de diagnóstico, reduzindo o tempo de intervenção do operador, além do custo e tempo de resposta.