Propagação in vitro de Cipreste-do-Buçaco (Cupressus lusitanica Mill.)

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: RAMALHO, Isa Raquel da Costa
Data de Publicação: 2022
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
Texto Completo: http://hdl.handle.net/10400.26/44962
Resumo: O objetivo do presente trabalho foi adaptar procedimentos para o estabelecimento, multiplicação, enraizamento e aclimatização da espécie Cupressus lusitanica Mill. Assim, testaram-se tempos de desinfeção e meios de cultura para o estabelecimento da espécie; avaliou-se a capacidade de multiplicação e alongamento in vitro, recorrendo a diferentes concentrações de sacarose e diferentes citocininas, em meio de cultura semissólido; testou-se a utilização de biorreatores de imersão temporária; e avaliou-se a capacidade rizogénica, tanto in vitro como ex vitro.Desta forma, utilizaram-se plantas existentes na coleção do CBPBI. Fez-se o estabelecimento de rebentos de C. lusitanica, em que se testaram três tempos diferentes de desinfeção (10, 15 e 30 minutos) e duas concentrações diferentes de hipoclorito de sódio (NaClO) (1:3 e 1:4), assim como dois meios de cultura diferentes, MS e DKW. A fase de multiplicação contou com dois ensaios diferentes em meio semissólido e um ensaio em meio líquido, com biorreatores de imersão temporária. Para o meio de cultura semissólido fez-se um ensaio em que se testaram 3 concentrações de sacarose: 10 g/L, 20 g/L e 30 g/L; e o outro, em que foram testadas 3 citocininas (2iP, BAP e KIN) com concentrações diferentes: 0,5 mg/L, 1 mg/L e 2 mg/L. O ensaio de biorreatores pretendeu testar diferentes intervalos de imersão, assim como a duração da imersão. Efetuou-se um ensaio de enraizamento in vitro e outro ex vitro. No ensaio in vitro, foram testadas diferentes concentrações de IBA: 1 mg/L, 3 mg/L e 5 mg/L; e no ensaio ex vitro, testaram-se dois substratos diferentes (jiffys e turfa com perlite) e duas condições dos rebentos: com agulhas na base e com remoção das agulhas na base.Os resultados mostraram que a espécie C. lusitanica apresentou uma taxa de infeção de 0%, nos rebentos que estiveram sujeitos a 10 minutos de desinfeção, com a concentração de NaClO de 1:3, em meio de cultura DKW. Para o parâmetro do comprimento dos rebentos maiores, o melhor resultado apresentou-se nas mesmas condições de teste, com o valor médio de 2,5 cm. No entanto, a taxa de multiplicação foi mais elevada quando os rebentos estiveram sujeitos a 10 minutos em NaClO, com uma concentração de 1:4, em meio MS. Relativamente aos ensaios de multiplicação, verificou-se que os rebentos que estiveram em meio com 20 g/L de sacarose obtiveram uma taxa de multiplicação mais elevada, assim como um maior comprimento. No ensaio de concentração de citocininas, os rebentos que estiveram sujeitos a 1 mg/L de 2iP, foram os que apresentaram maior taxa de multiplicação e rebentos maiores. O ensaio de biorreatores de imersão temporária não obteve resultados fidedignos, devido a falhas técnicas no sistema informático de controlo do programa de imersão. Quanto ao ensaio de enraizamento in vitro, os resultados não foram considerados favoráveis, uma vez que em todas as concentrações a percentagem de enraizamento foi inferior a 10%. O ensaio ex vitro teve como melhores resultados os rebentos que estiveram em jiffys, com a remoção das agulhas, contando com cerca de 73% de plântulas enraizadas.
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Fez-se o estabelecimento de rebentos de C. lusitanica, em que se testaram três tempos diferentes de desinfeção (10, 15 e 30 minutos) e duas concentrações diferentes de hipoclorito de sódio (NaClO) (1:3 e 1:4), assim como dois meios de cultura diferentes, MS e DKW. A fase de multiplicação contou com dois ensaios diferentes em meio semissólido e um ensaio em meio líquido, com biorreatores de imersão temporária. Para o meio de cultura semissólido fez-se um ensaio em que se testaram 3 concentrações de sacarose: 10 g/L, 20 g/L e 30 g/L; e o outro, em que foram testadas 3 citocininas (2iP, BAP e KIN) com concentrações diferentes: 0,5 mg/L, 1 mg/L e 2 mg/L. O ensaio de biorreatores pretendeu testar diferentes intervalos de imersão, assim como a duração da imersão. Efetuou-se um ensaio de enraizamento in vitro e outro ex vitro. No ensaio in vitro, foram testadas diferentes concentrações de IBA: 1 mg/L, 3 mg/L e 5 mg/L; e no ensaio ex vitro, testaram-se dois substratos diferentes (jiffys e turfa com perlite) e duas condições dos rebentos: com agulhas na base e com remoção das agulhas na base.Os resultados mostraram que a espécie C. lusitanica apresentou uma taxa de infeção de 0%, nos rebentos que estiveram sujeitos a 10 minutos de desinfeção, com a concentração de NaClO de 1:3, em meio de cultura DKW. Para o parâmetro do comprimento dos rebentos maiores, o melhor resultado apresentou-se nas mesmas condições de teste, com o valor médio de 2,5 cm. No entanto, a taxa de multiplicação foi mais elevada quando os rebentos estiveram sujeitos a 10 minutos em NaClO, com uma concentração de 1:4, em meio MS. Relativamente aos ensaios de multiplicação, verificou-se que os rebentos que estiveram em meio com 20 g/L de sacarose obtiveram uma taxa de multiplicação mais elevada, assim como um maior comprimento. No ensaio de concentração de citocininas, os rebentos que estiveram sujeitos a 1 mg/L de 2iP, foram os que apresentaram maior taxa de multiplicação e rebentos maiores. O ensaio de biorreatores de imersão temporária não obteve resultados fidedignos, devido a falhas técnicas no sistema informático de controlo do programa de imersão. Quanto ao ensaio de enraizamento in vitro, os resultados não foram considerados favoráveis, uma vez que em todas as concentrações a percentagem de enraizamento foi inferior a 10%. O ensaio ex vitro teve como melhores resultados os rebentos que estiveram em jiffys, com a remoção das agulhas, contando com cerca de 73% de plântulas enraizadas.The aim of the present work was to adapt procedures for the establishment, multiplication, rooting and acclimatization of the species Cupressus lusitanica Mill. Disinfection times and culture media were tested for the establishment of the species; the in vitro multiplication and elongation capacity was evaluated, using different cytokinins and different sucrose concentrations, in solid culture medium; the use of temporary immersion bioreactors was tested; and, the rhizogenic capacity was evaluated, both in vitro and ex vitro.Plants from the CBPBI collection were used. The establishment of C. lusitanica shoots was carried out, in which three different disinfection times (10, 15 and 30 minutes) and two different concentrations of sodium hypochlorite (NaClO) (1:3 and 1:4) were tested, as well as two different culture media, MS and DKW. The multiplication phase included two different trials in semi-solid medium and one trial in liquid medium, with temporary immersion bioreactors. For the semi-solid culture medium there was one trial in which three concentrations of sucrose were tested: 10 g/L, 20 g/L and 30 g/L; and the other, in which three cytokinins were tested (2iP, BAP and KIN) with different concentrations: 0.5 mg/L, 1 mg/L and 2 mg/L. The bioreactor trial aimed to test different immersion times, as well as the immersion duration. An in vitro and an ex vitro rooting assay were performed. In the in vitro assay, different concentrations of IBA were tested: 1 mg/L, 3 mg/L and 5 mg/L; and in the ex vitro assay two different substrates (jiffys and peat with perlite) and two conditions of the shoots: with needles at the base and with removal of the needles at the base.The results showed that C. lusitanica showed a 0% infection rate on shoots that were subjected to 10 minutes of disinfection, with a NaClO concentration of 1:3, in DKW culture medium. For the length parameter of the largest shoots, the best result was found under the same test conditions with an average value of 2.5 cm. However, the multiplication rate was higher when the shoots were subjected to 10 minutes in NaClO, at a concentration of 1:4, in MS medium. Regarding the multiplication assays, the shoots that were in medium with 20 g/L of sucrose obtained a higher multiplication rate, as well as a greater length. In the cytokinin concentration assay, the shoots that were subjected to 1 mg/L of 2iP, had the highest multiplication rate and larger shoots. The temporary immersion bioreactor assay did not obtain reliable results, due to technical failures in the computer control system of the immersion programme. As for the in vitro rooting test, the results were not considered favorable, since in all concentrations the rooting percentage was less than 10%. The best results in the ex vitro test were the shoots that were in jiffys, with the removal of the needles, with about 73% of rooted seedlings.Gomes, Maria Filomena Figueiredo NazaréRepositório ComumRAMALHO, Isa Raquel da Costa2023-06-06T00:30:44Z2022-12-062022-12-06T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfhttp://hdl.handle.net/10400.26/44962TID:203290690porinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)instname:Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãoinstacron:RCAAP2023-06-08T02:15:50Zoai:comum.rcaap.pt:10400.26/44962Portal AgregadorONGhttps://www.rcaap.pt/oai/openaireopendoar:71602024-03-19T17:59:31.288456Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos) - Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãofalse
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