Avaliação da função mitocondrial como consequência da exposição a compostos naturais com potencial terapêutico

• Autor(a) principal: Ramos, Sara Daniela Cerqueira
• Data de Publicação: 2016
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10348/6362
• topic: Fitol; Geraniol; Mirtenol; Mitocôndria; Toxicidade

A mitocôndria desempenha um papel chave na bioenergética celular, sendo o principal local de síntese de ATP. Participa na regulação de vários aspectos biológicos celulares, como na morte celular, no estado redox, na promoção da homeostase do cálcio e na apoptose. Os terpenóides são amplamente encontrados na natureza e constituem uma grande variedade de substâncias vegetais. São classificados de acordo com o número de carbonos, em que o geraniol e o mirtenol são monoterpenóides e fitol é um diterpenóide. Os monoterpenos são os principais componentes dos óleos essenciais, enquanto os outros terpenos são componentes de bálsamos, resinas, ceras e borrachas. São hidrofóbicos e actuam na membrana dos organismos, podendo provocar alterações nesta e até mesmo lise celular. Os diterpenos possuem funções antioxidantes, anti carcinogénicas, anti-inflamatórias e anti bactericidas. Testou-se o fitol (25μM, 50μM, 100μM e 250μM), o geraniol (25μM, 50μM e 100μM) e o mirtenol (25μM, 50μM e 100μM) em mitocôndrias hepáticas isoladas de ratos e na linha celular HepG2 com o intuito de se ver se a estas concentrações os compostos possuíam toxicidade. Avaliou-se a nível mitocondrial, o potencial transmembranar através de um eléctrodo de TPP+, o consumo de oxigénio, a indução da MPT com Ca2+, a medição de fluxos de Ca2+, a quantificação de citocromo c através do Western blott e a produção de espécies reactivas de oxigénio. A nível celular avaliou-se o crescimento celular através do uso de Sulfarrodamina B, a viabilidade celular através do uso do MTT e a produção de espécies reactivas oxigénio. Relativamente ao fitol, nas concentrações usadas e quando comparadas com o controlo, só o estado 4 apareceu sempre ligeiramente aumentado. Apresentou um efeito protector na indução da MPT e não induziu a produção de ROS pelas mitocôndrias isoladas e pela cultura celular HepG2. Não apresentou efeito na viabilidade e na morte celular. Quanto ao geraniol, nas concentrações usadas e quando comparadas com o controlo, as concentrações 50 μM e 100 μM induziram uma ligeira diminuição tanto no potencial inicial, como na repolarização. Contrariamente ao estado 4 e à V oligomicina em que ambos se apresentam aumentados em todas as concentrações. As concentrações 25 μM e 50 μM mantiveram o conteúdo citocromo c mitocondrial enquanto que a 100 μM induziu a abertura da MPT. Tanto a nível mitocondrial, como celular houve um aumento da produção de ROS. Relativamente ao MTT, o resultado corroborou directamente com o resultado obtido no ensaio da Sulfarrodamina B, uma maior morte celular levou a que houvessem menos células activas e consequentemente uma menor viabilidade celular. Relativamente ao mirtenol, nas concentrações usadas e quando comparadas com o controlo, a concentração 50 μM induziu uma ligeira diminuição na repolarização. Contrariamente ao estado 4 e à V oligomicina que se apresentaram aumentados em todas as concentrações. As concentrações 25 μM e 50 μM do mirtenol, mantiveram o conteúdo citocromo c mitocondrial enquanto que a 100 μM induziu a abertura da MPT. Tanto a nível mitocondrial, como celular houve um aumento da produção de ROS. Relativamente ao MTT, o resultado corroborou directamente com o resultado obtido no ensaio da Sulfarrodamina B, uma maior morte celular levou a que houvessem menos células activas e consequentemente uma menor viabilidade celular. Conclui-se assim que os compostos geraniol e mirtenol possuem actividade hepatotóxica e que estes efeitos tóxicos são revelados não apenas a nível celular, mas também a nível mitocondrial.