PD-1 signaling in Natural Killer cells and Chronic Myeloid Leukemia therapy.

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Almeida, Ana Beatriz Eira de
Data de Publicação: 2017
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: eng
Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
Texto Completo: http://hdl.handle.net/10316/82862
Resumo: Dissertação de Mestrado em Bioquímica apresentada à Faculdade de Ciências e Tecnologia
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spelling PD-1 signaling in Natural Killer cells and Chronic Myeloid Leukemia therapy.Sinalização do PD-1 em células Natural Killer e terapia de Leucemia Mielóide Crónica.Leucemia Mieloide CrónicaInibidores de Tirosina CinaseCélulas Natural KillerRecetor de morte programada-1Chronic Myeloid LeukemiaTyrosine Kinase InhibitorsNatural Killer cellsProgrammed Death Receptor-1Dissertação de Mestrado em Bioquímica apresentada à Faculdade de Ciências e TecnologiaA leucemia mieloide crónica (LMC) é uma doença mieloproliferativa maligna que se desenvolve quando as células estaminais hematopoiéticas adquirem o cromossoma Philadelphia, sendo que este resulta da translocação entre os cromossomas 9 e 22. O resultado molecular desta translocação é uma proteína de fusão BCR-ABL,que se encontra constitutivamente ativada com ação de tirosina cinase . O uso de inibidores de tirosina cinase (TKIs) representam a terapia de referência em LMC, no entanto o único tratamento curativo é o transplante alogénico de células estaminais hematopoiéticas. O sistema imunitário, em particular as células Natural Killer e as CD8+ T, têm vindo a demonstrar ter um papel importante no controlo da LMC. No entanto as células tumorais desenvolvem diferentes mecanismos imunosupressores para escapar ao controlo do sistema imune. Um destes mecanismos é o aumento da expressão de immune checkpoints nas células imunes. O mais destacado nos últimos tempos é o recetor de morte programada-1 (PD-1); os anticorpos monoclonais para este recetor e para os seus ligandos tem vindo a ser descritos como uma arma promissora na imunoterapia. O objetivo principal deste trabalho foi estudar o papel do PD-1 nas células NK na LMC. Em primeiro lugar, a expressão do PD-1 e dos seus ligandos foi analisada por citometria de fluxo em 37 doentes com diferentes características clínicas. Os doentes em diagnóstico tiveram a expressão mais elevada de PD-1, demonstrando que a terapia tem a capacidade de modular o papel do PD-1. Além disso, quando os resultados foram analisados de acordo com a resposta molecular, a terapêutica também demonstrou a sua capacidade de diminuir a expressão do PD-1. A partir do momento em que os doentes atingiram uma pre resposta molecular major verificou-se uma tendência para a percentagem de células que expressam PD-1 diminuir com uma resposta molecular mais profunda . Foi medida uma maior concentração do PD-L1 solúvel comparativamente com o PD-1 solúvel, e para além disto o sPD-L1 teve a tendência para aumentar com uma resposta molecular mais profunda. Desta forma, 4 doentes em tratamento com uma resposta molecular 5.0 logs (MR5.0) foram selecionados para proceder as experiências com os anticorpos bloqueadores. O efeito destes anticorpos foi avaliado pela medição das funções citotóxicas e citolíticas das células NK. Desta forma, a desgranulação e a produção de IFN- e Granzima B foram medidos por citometria de fluxo. Adicionalmente, também se mediu a citotoxicidade direta mediada pelas células NK através do ensaio NK-TVA. Os resultados desta experiência com doentes de LMC, demonstraram que os anticorpos bloqueadores não aumentaram o potencial citotóxico das células NK, excluindo a possibilidade dos doentes com estas características clínicas poderem vir a beneficiar de imunoterapia com anticorpos bloqueadores.Chronic myeloid leukemia (CML) is a malignant myeloproliferative disease developed when hematopoietic stem cells (HSCs) acquire the Philadelphia (Ph) chromosome, which is caused by the translocation between chromosomes 9 and 22. The molecular result of this translocation is a fusion protein BCR-ABL, which is a constitutively active tyrosine kinase. Tyrosine kinase inhibitors (TKIs) targeting the BCR-ABL kinase represent the standard care in CML, however the only curative treatment is the allogeneic HSCs transplantation. The immune system, in particular Natural Killer cells and CD8+ T cells, have been demonstrate to have an important role in CML control. Still, different immunosuppressive mechanisms are developed by tumour cells in order to escape immune surveillance. One of the immunosuppressive mechanisms is the expression of checkpoint inhibitors by the immune cells. Programmed death receptor 1 (PD-1) is the most remarkable of recent times, likewise monoclonal antibodies against this receptor and its ligands have been described as the new weapon of immunotherapy. The main goal of this work was to understand the role of PD-1 on NK cells in CML disease. In the first place, the expression of PD-1 and its ligands were analysed by flow cytometry in 37 CML patients with different clinical characteristics. Naïve patients showed the highest expression of PD-1, demonstrating that TKIs have the capacity to modulate PD-1 role. From the moment that CML patients achieved a pre major molecular response (Pre-MMR), the percentage of cells expressing PD-1 tends to increase with a deep molecular response. Higher concentrations of sPD-L1 were measured compared to sPD-1 and it was also shown a tendency to increase the sPD-L1 with a deepness MR. In this way, 4 patients undergoing Imatinib with a molecular response of 5.0logs (MR5.0) were chosen to proceed blocking experiences. The effect of blockade was assessed by the measurement of NK cytotoxicity functions and cytokine production. For this purpose, degranulation, IFN- and the Granzyme B production were measured by flow cytometry. Additionally, a NK-TVA assay was also done to measure the direct NK-mediated cytotoxicity. The results of blocking experiences in CML patients did not show the improvement of NK cells functions, excluding the possibility that CML patients, with these clinical characteristics, could benefit with the blocking antibodies to improve NK cells functions.Outro - Funded by the FEDER Funds through COMPETE 2020 and by FCT within the framework of the Strategic Project with reference assigned by COMPETE: POCI-01-0145-FEDER-007440.2017-09-279999-12-31T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesishttp://hdl.handle.net/10316/82862http://hdl.handle.net/10316/82862TID:202120481engAlmeida, Ana Beatriz Eira deinfo:eu-repo/semantics/embargoedAccessreponame:Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)instname:Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãoinstacron:RCAAP2023-10-27T10:49:01Zoai:estudogeral.uc.pt:10316/82862Portal AgregadorONGhttps://www.rcaap.pt/oai/openaireopendoar:71602024-03-19T21:04:43.359825Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos) - Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãofalse
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