The role of the RhoGEF protein Solo in Src regulation in triple-negative breast cancer

• Autor(a) principal: FERREIRA, Miguel Ângelo
• Data de Publicação: 2023
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: eng
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10362/159157
• topic: Microbiologia médica; Cancro da mama; Triplo-negativo; Biologia molecular; Saúde tropical e internacional; Domínio/Área Científica::Ciências Médicas

O cancro da mama triplo-negativo (TNBC) é o mais agressivo subgrupo de cancro da mama (BC), associado a uma elevada chance de metastização. Para que a metastização possa ocorrer, migração celular é necessária. Este processo é dependente de adesões focais (FAs), cruciais para a ancoragem e para a comunicação da célula com a matriz extracelular (ECM), e do citoesqueleto de actina, que é fortemente regulado por Rho GTPases. A proteína RhoGEF Solo foi observada estar sobreexpressa em células TNBC e a sua depleção resultar numa diminuição em motilidade celular. Adicionalmente, Solo foi recentemente descoberta como sendo reguladora de RhoB em membranas endossomais em células HeLa. Além disto, RhoB está associada com o tráfego de proteínas sinalizadoras em endossomas entre a região peri-nuclear e a periferia celular. Uma destas proteínas é a quinase Src, uma das principais proteínas das FAs, frequentemente sobreexpressa em células TNBC. Curiosamente, dados do nosso laboratório revelaram Solo como sendo fosforilada por Src mas uma função não foi ainda identificada. Para além disto, o papel de Solo no tráfego de Src ainda não foi descrito. O objetivo desta tese foi estudar os efeitos do knock down de Solo no tráfego de Src e no desenvolvimento de FAs por imunofluorescência. Para isto, as linhas celulares MDA MB-231 e BT549 foram selecionadas enquanto sistemas modelo. Células shSolo MDA MB-231estáveis induzidas por doxiciclina foram também geradas. Curiosamente, foi possível observar que ambos os knock down transiente e estável de Solo resultaram na acumulação de Src na região subcelular peri-nuclear e na redução da atividade de Src em células shSolo MDA-MB-231. Células shSolo apresentaram FAs mais longas e níveis de fosfotirosina reduzidos na periferia celular. Adicionalmente, os níveis de fosfotirosina do efetor downstream de Src, Paxilina, foi observado como estando diminuídos nas FAs, mesmo que um aumento global na fosforilação de Paxilina tenha sido quantificado. Numa matriz 3D, agrupamentos de células shSolo MDA-MB-231mostraram uma diminuição dos níveis de Src assim como menos Src extracelular. Em suma, estes resultados sugerem que Solo afeta o tráfego de Src entre as região peri-nuclear e a periferia celular. No futuro, considerando que ambas as proteínas Solo e Src estão conectadas com endossomas RhoB-positivos, seria relevante identificar outras vias que poderão ser afetadas por este eixo. Adicionalmente, as linhas celulares BT549 e HS578T poderão ser usados como modelos para ensaios adicionais de forma a compreender se os efeitos observados nesta tese são conservados em diferentes linhas celulares de TNBC. Em resumo, detalhar a base subjacente do papel de Solo em TNBC é essencial para compreender o seu fenótipo agressivo e para o desenvolvimento de tratamentos futuros.