Estudo da proteína humana centrossomal TBCCD1 em condições de stress oxidativo causadas por H202 em estado estacionário

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Carvalhal, Sara Isabel Guerra
Data de Publicação: 2010
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
Texto Completo: http://hdl.handle.net/10451/5364
Resumo: Tese de mestrado, Bioquímica (Bioquímica Médica), Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências, 2010
id RCAP_2ba646e665875d72c461f43db110ee64
oai_identifier_str oai:repositorio.ul.pt:10451/5364
network_acronym_str RCAP
network_name_str Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
repository_id_str 7160
spelling Estudo da proteína humana centrossomal TBCCD1 em condições de stress oxidativo causadas por H202 em estado estacionárioEstado estacionário de H2O2TBCCD1Y−tubulinaCentrossomaTeses de mestrado - 2010Tese de mestrado, Bioquímica (Bioquímica Médica), Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências, 2010O peróxido de hidrogénio (H2O2) embora seja um oxidante relativamente fraco, é capaz de alterar o nível de oxidação dos grupos tióis ao reagir com resíduos de cisteínas. Essas propriedades tornam o H2O2 uma das espécies reactivas de oxigénio (ERO) com potencialidade para participar em vias de sinalização. Deste modo, o desencadeamento de uma determinada via de sinalização, ou a sua modulação, deverá ocorrer pelo aumento temporário das concentrações de H2O2, como por exemplo, durante a resposta inflamatória. Por outro lado, a exposição prolongada a algumas ERO têm vindo a ser relacionada com o início, progressão e desenvolvimento tumoral. Muitos dos tumores são caracterizados por aneuploidia e anormalidades centrossomais. Por exemplo, células de mamífero expostas a H2O2, por bolus addition, apresentam centrossomas supra-numerários. Neste contexto iniciou-se o estudo da influência de concentrações sinalizadoras de H2O2 nos níveis de duas proteínas centrossomais, a proteína TBCCD1 (TBCC-domain containing protein 1) e a y−tubulina nas linhas celulares humanas HeLa e hTERT-RPE-1. O TBCCD1 é um potencial regulador do posicionamento do centrossoma e da organização citoplasmática, a y−tubulina é uma proteína chave na nucleação dos microtúbulos nos centros organizadores de microtúbulos, como o centrossoma. Por western blot mostrou-se, em ambas as linhas celulares, o aumento dos níveis de TBCCD1 ao longo do tempo de exposição de H2O2 em estado estacionário. A análise da velocidade de consumo de H2O2 em células hTERT-RPE-1 que sobre-expressam a proteína de fusão TBCCD1-GFP mostrou um relação directa desta com o aumento dos níveis de TBCCD1-GFP. Esta proteína, na presença de H2O2, varia de modo análogo à proteína endógena. Estudos similares mostraram a diminuição dos níveis de y−tubulina ao longo do tempo de exposição de H2O2. Por microscopia de imunofluorescência indirecta observou-se também a diminuição dos níveis desta proteína no centrossoma em células HeLa. Observou-se ainda uma alteração da capacidade de nucleação dos microtúbulos pelo centrossoma e uma modificação na organização destes após repolimerização em células previamente tratadas com nocodazole e após remoção desta. No conjunto, estes resultados mostram que ambos os níveis destas proteínas variam na presença de baixos concentrações de H2O2, constituindo este trabalho uma abordagem inicial do efeito do H2O2 em concentrações reguladoras no centrossoma.The hydrogen peroxide (H2O2) although a relatively weak oxidant, is highly reactive with sulfhydryl groups. These properties make the H2O2 a reactive oxygen species (ROS) with the potential to participate as a regulator in signaling pathways. Thus, the temporary increase in the concentrations of H2O2 should trigger or modulate a signal pathway, such as during the inflammatory response. Moreover, prolonged exposure to some ROS has been related with the initiation, progression and tumor development. Many tumors are characterized by aneuploidy and centrosomal abnormalities. For example, mammalian cells exposed to H2O2 by bolus addition showed supra-numerary centrosomes. In this context we began the study of the influence of signaling concentrations of H2O2 in the levels of two centrosomal proteins, protein TBCCD1 (TBCC domain-containing protein 1) and y − tubulin in HeLa and hTERT-RPE-1 human cell lines. The TBCCD1 is a potential regulator of the positioning of the centrosome and cytoplasmic organization and the y − tubulin is a key protein in the nucleation of microtubules on microtubule organizing centers, such as the centrosome. By western blot, we detected in both cell lines, increased levels of TBCCD1 over time of exposure to a steady state of H2O2. The analysis of H2O2 consumption by intact hTERT-RPE-1 cells that over-expresses the fusion protein TBCCD1-GFP showed a direct relationship of this with increased levels of TBCCD1-GFP. Noteworthy, in the presence of H2O2, the TBCCD1-GFP levels, showed the same variation that those of the endogenous protein. Similar studies showed that −tubulin levels decreased of upon an exposition to H2O2. By immunolocalization microscopy we observed in HeLa cells a decrease of y − tubulin’s levels at the centrosome. To investigate if this observation has an impact in the ability of centrosomes to nucleate microtubules we have treated HeLa cells, previously exposed to steady-state levels of H2O2, with the antimitotic drug nocodozole. After washing out this microtubule depolymerizing agent we follow microtubule repolymerization by immunofluorescence microscopy. We observed that cells treated with H2O2 present a different ability to nucleate microtubules in comparison to control cells. At end these cells presented a distinct organization of the microtubule cytoskeleton. Taken together the results presented in this work show that a low concentration of H2O2 promotes a variation of the TBCCD1 and y − tubulin’s levels. Therefore, this work constitutes an initial approach to the study of the impact at the centrosome of H2O2 at levels expected for a signaling role.Soares, Maria Helena AntunesCyrne, Maria Luísa Santos de Sousa, 1954-Repositório da Universidade de LisboaCarvalhal, Sara Isabel Guerra2012-02-22T15:10:49Z20102010-01-01T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfhttp://hdl.handle.net/10451/5364porinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)instname:Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãoinstacron:RCAAP2023-11-08T15:47:01Zoai:repositorio.ul.pt:10451/5364Portal AgregadorONGhttps://www.rcaap.pt/oai/openaireopendoar:71602024-03-19T21:30:44.884822Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos) - Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãofalse
dc.title.none.fl_str_mv Estudo da proteína humana centrossomal TBCCD1 em condições de stress oxidativo causadas por H202 em estado estacionário
title Estudo da proteína humana centrossomal TBCCD1 em condições de stress oxidativo causadas por H202 em estado estacionário
spellingShingle Estudo da proteína humana centrossomal TBCCD1 em condições de stress oxidativo causadas por H202 em estado estacionário
Carvalhal, Sara Isabel Guerra
Estado estacionário de H2O2
TBCCD1
Y−tubulina
Centrossoma
Teses de mestrado - 2010
title_short Estudo da proteína humana centrossomal TBCCD1 em condições de stress oxidativo causadas por H202 em estado estacionário
title_full Estudo da proteína humana centrossomal TBCCD1 em condições de stress oxidativo causadas por H202 em estado estacionário
title_fullStr Estudo da proteína humana centrossomal TBCCD1 em condições de stress oxidativo causadas por H202 em estado estacionário
title_full_unstemmed Estudo da proteína humana centrossomal TBCCD1 em condições de stress oxidativo causadas por H202 em estado estacionário
title_sort Estudo da proteína humana centrossomal TBCCD1 em condições de stress oxidativo causadas por H202 em estado estacionário
author Carvalhal, Sara Isabel Guerra
author_facet Carvalhal, Sara Isabel Guerra
author_role author
dc.contributor.none.fl_str_mv Soares, Maria Helena Antunes
Cyrne, Maria Luísa Santos de Sousa, 1954-
Repositório da Universidade de Lisboa
dc.contributor.author.fl_str_mv Carvalhal, Sara Isabel Guerra
dc.subject.por.fl_str_mv Estado estacionário de H2O2
TBCCD1
Y−tubulina
Centrossoma
Teses de mestrado - 2010
topic Estado estacionário de H2O2
TBCCD1
Y−tubulina
Centrossoma
Teses de mestrado - 2010
description Tese de mestrado, Bioquímica (Bioquímica Médica), Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências, 2010
publishDate 2010
dc.date.none.fl_str_mv 2010
2010-01-01T00:00:00Z
2012-02-22T15:10:49Z
dc.type.status.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/publishedVersion
dc.type.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/masterThesis
format masterThesis
status_str publishedVersion
dc.identifier.uri.fl_str_mv http://hdl.handle.net/10451/5364
url http://hdl.handle.net/10451/5364
dc.language.iso.fl_str_mv por
language por
dc.rights.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/openAccess
eu_rights_str_mv openAccess
dc.format.none.fl_str_mv application/pdf
dc.source.none.fl_str_mv reponame:Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
instname:Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informação
instacron:RCAAP
instname_str Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informação
instacron_str RCAAP
institution RCAAP
reponame_str Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
collection Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
repository.name.fl_str_mv Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos) - Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informação
repository.mail.fl_str_mv
_version_ 1799134195659833344

Registros relacionados