Clonagem, expressão e purificação da sinfilina-1 e da parkina

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Franco, Maria Helena Coelho de Sousa
Data de Publicação: 2010
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
Texto Completo: http://hdl.handle.net/10451/3705
Resumo: Tese de mestrado, Bioquímica (Bioquímica Médica), Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências, 2010
id RCAP_374f649a7e1a26763941b541b5b8bbf8
oai_identifier_str oai:repositorio.ul.pt:10451/3705
network_acronym_str RCAP
network_name_str Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
repository_id_str 7160
spelling Clonagem, expressão e purificação da sinfilina-1 e da parkinaCorpos de LewyParkinaPARK2Parkinsonismo Juvenil Autossómico RecessivoPurificação de proteínasSinfilina-1SubclonagemTeses de mestrado - 2010Tese de mestrado, Bioquímica (Bioquímica Médica), Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências, 2010A Doença de Parkinson (DP) é a doença neurodegenerativa mais comum a seguir à doença de Alzheimer e está associada à degeneração dos neurónios dopaminérgicos da pars compacta da substantia nigra (SNpc). Nesta doença, o misfolding, o unfolding e a agregação proteica, em conjunto com uma resposta disfuncional da célula ao stress induzido pelas espécies parcialmente desnaturadas, pode estar na origem de danos celulares que conduzem à degeneração dos neurónios dopaminérgicos. A DP é essencialmente idiopática, à excepção de um número reduzido de indivíduos que são portadores de um gene mutante (<10 % dos casos de Parkinson) ou que foram expostos a agentes indutores de parkinsonismo, como o MPTP. A etiologia da DP resulta da interacção dinâmica de factores genéticos e ambientais, em que a acumulação de proteínas parcialmente desnaturadas, a presença de agregados e de proteínas ubiquitinadas nos corpos de Lewy, sugere um motivo comum a interrelacionar estes factores. Dentro da DP hereditária, existe um grupo restrito cuja sintomatologia precoce e a ausência de Corpos de Lewy é denominada como Parkinsonismo Juvenil Autossómico Recessivo. Neste contexto, os estudos genéticos revelaram a presença de variadas mutações associadas ao gene da Parkina, uma proteína com 465 resíduos de aminoácidos com uma massa molecular aparente de 52 kDa. A sua função está relacionada com as vias de degradação de proteínas, sendo considerada um ligase entre a ubiquitina e a proteína alvo possuindo também um domínio N-terminal idêntico à ubiquitina, cuja função permanece desconhecida. Actualmente, os estudos in vitro desenvolvidos com a Parkina humana têm sido realizados exclusivamente com domínios desta, uma vez que a purificação da Parkina de forma integral tem-se revelado uma tarefa árdua. Esta dificuldade tem se observado devido à elevada complexicidade do processo de folding, uma vez que a proteína apresenta variados domínios e complexa com iões zinco. A Sinfilina-1, uma proteína de interacção da α-sinucleína, é um dos substratos ubiquitinados pela Parkina. Desde que foi descoberta, em 1999, têm sido desenvolvidos estudos que demonstram a existência de uma relação entre a Sinfilina-1 e a doença de Parkinson. No entanto, apesar de ainda não ser conhecido o seu papel na patologia está cientificamente aceite que a Sinfilina-1 é capaz de promover a formação de inclusões semelhantes a corpos de Lewy. O objectivo fundamental deste trabalho consistiu na expressão e purificação de duas proteínas de relevância para a doença de Parkinson: a Parkina e a Sinfilina-1. A expressão e a purificação destas proteínas potenciam estudos estruturais, estudos de folding e de estabilidade, bem como as alterações da interacção entre a Parkina, Sinfilina-1 e α-sinucleína. No presente estudo desenvolveu-se uma metodologia de purificação da Parkina e da Sinfilina-1, de forma integrada, com o objectivo de elucidar o envolvimento da Parkina na patogénese da Doença de Parkinson.Parkinson's Disease (PD) is the most common neurodegenerative disease after Alzheimer's disease and is associated with degeneration of dopamine neurons in the substantia nigra pars compacta (SNpc). In this disease, misfolding, unfolding and protein aggregation, together with a dysfunctional response to cell stress induced by the partially denatured species, could cause cell damage that, in turn, leads to degeneration of dopaminergic neurons. PD is primarily idiopathic, with the exception of a few individuals who are carriers of a mutated gene (<10% of cases of Parkinson's) or who were exposed to agents that induce Parkinsonism, such as MPTP. The etiology of PD results from the dynamic interplay of genetic and environmental factors in the accumulation of partially denatured, aggregated and ubiquitinated proteins in Lewy bodies, suggesting a common motif connecting these factors. Within hereditary PD, a small group, known as autosomal recessive juvenile Parkinsonism, is characterized by early symptoms and the absence of Lewy bodies. In this context, genetic studies revealed the presence of various gene mutations associated with Parkin gene, a protein with 465 amino acid residues with an apparent molecular mass of 52 kDa. Parkin plays a role in protein degradation, being considered an ubiquitin ligase and possesses an N-terminal domain similar to ubiquitin, whose function remains unknown. Currently, in vitro studies developed with human Parkin have been performed exclusively with protein domains, since the purification of complete Parkin has proved to be an arduous task. This difficulty has been observed due to the high complexity of folding, since the protein has different domains and complexes with zinc ions. Synphilin-1, an interaction protein of α-synuclein, is also a Parkin substrate. Since its discovery in 1999, studies have been developed that demonstrate the existence of a relationship between Synphilin-1 and Parkinson's disease. Although its contribution to the pathology is still unknown, it is scientifically accepted that Synphilin-1 can promote the formation of inclusions similar to Lewy bodies. The basic aim of this work consisted in the expression and purification of two proteins of relevance to Parkinson's disease: Synphilin-1 and Parkin. The expression and purification of these proteins potentiate structural, folding and stability studies, as well as modifications in the interaction between Parkin, Synphilin-1 and α-synuclein. In this study a methodology was developed for purification os Parkin and Synphilin-1, as well as protein with the aim of elucidating the involvement of Parkin in the pathogenesis of Parkinson´s disease in future studies.Quintas, AlexandreFreire, Ana Ponces, 1948-Repositório da Universidade de LisboaFranco, Maria Helena Coelho de Sousa2011-07-13T11:52:00Z20102010-01-01T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfhttp://hdl.handle.net/10451/3705porinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)instname:Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãoinstacron:RCAAP2023-11-08T15:44:19Zoai:repositorio.ul.pt:10451/3705Portal AgregadorONGhttps://www.rcaap.pt/oai/openaireopendoar:71602024-03-19T21:29:32.424761Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos) - Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãofalse
dc.title.none.fl_str_mv Clonagem, expressão e purificação da sinfilina-1 e da parkina
title Clonagem, expressão e purificação da sinfilina-1 e da parkina
spellingShingle Clonagem, expressão e purificação da sinfilina-1 e da parkina
Franco, Maria Helena Coelho de Sousa
Corpos de Lewy
Parkina
PARK2
Parkinsonismo Juvenil Autossómico Recessivo
Purificação de proteínas
Sinfilina-1
Subclonagem
Teses de mestrado - 2010
title_short Clonagem, expressão e purificação da sinfilina-1 e da parkina
title_full Clonagem, expressão e purificação da sinfilina-1 e da parkina
title_fullStr Clonagem, expressão e purificação da sinfilina-1 e da parkina
title_full_unstemmed Clonagem, expressão e purificação da sinfilina-1 e da parkina
title_sort Clonagem, expressão e purificação da sinfilina-1 e da parkina
author Franco, Maria Helena Coelho de Sousa
author_facet Franco, Maria Helena Coelho de Sousa
author_role author
dc.contributor.none.fl_str_mv Quintas, Alexandre
Freire, Ana Ponces, 1948-
Repositório da Universidade de Lisboa
dc.contributor.author.fl_str_mv Franco, Maria Helena Coelho de Sousa
dc.subject.por.fl_str_mv Corpos de Lewy
Parkina
PARK2
Parkinsonismo Juvenil Autossómico Recessivo
Purificação de proteínas
Sinfilina-1
Subclonagem
Teses de mestrado - 2010
topic Corpos de Lewy
Parkina
PARK2
Parkinsonismo Juvenil Autossómico Recessivo
Purificação de proteínas
Sinfilina-1
Subclonagem
Teses de mestrado - 2010
description Tese de mestrado, Bioquímica (Bioquímica Médica), Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências, 2010
publishDate 2010
dc.date.none.fl_str_mv 2010
2010-01-01T00:00:00Z
2011-07-13T11:52:00Z
dc.type.status.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/publishedVersion
dc.type.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/masterThesis
format masterThesis
status_str publishedVersion
dc.identifier.uri.fl_str_mv http://hdl.handle.net/10451/3705
url http://hdl.handle.net/10451/3705
dc.language.iso.fl_str_mv por
language por
dc.rights.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/openAccess
eu_rights_str_mv openAccess
dc.format.none.fl_str_mv application/pdf
dc.source.none.fl_str_mv reponame:Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
instname:Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informação
instacron:RCAAP
instname_str Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informação
instacron_str RCAAP
institution RCAAP
reponame_str Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
collection Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
repository.name.fl_str_mv Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos) - Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informação
repository.mail.fl_str_mv
_version_ 1799134179922804736

Registros relacionados