Deep-sea pharmacies: exploring deep-sea Actinobacteria for the production of novel natural products with pharmaceutical applications

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Amorim, Cláudia Teresa Pinto
Data de Publicação: 2021
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: eng
Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
Texto Completo: http://hdl.handle.net/1822/70831
Resumo: Dissertação de mestrado em Biotechnology
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spelling Deep-sea pharmacies: exploring deep-sea Actinobacteria for the production of novel natural products with pharmaceutical applicationsActinobacteriaAnticancerAntimicrobialDeep-seaActinobactériasAnticancroAntimicrobianoMar profundoCiências Médicas::Biotecnologia MédicaDissertação de mestrado em BiotechnologyAntibiotic resistance is a big threat to global health, as the treatment of a growing number of bacterial infections is becoming a serious problem. In addition, cancer is responsible for the death of millions of people every year and resistance to available therapies is of big concern. It is well established that Actinobacteria are prolific producers of bioactive compounds with pharmaceutical applications. Bioprospecting unexplored or underexplored environments, like the deepsea, may be a key for the discovery of new bioactive molecules. This work aimed to study the biodiversity of the cultivable Actinobacteria associated with deep-sea samples from Portugal, and investigate the antimicrobial and cytotoxic potential of the isolated strains. Nine deep-sea samples, that included sponges, corals and sediments, were collected at the Madeira archipelago at depths between 463 m and 865 m, using the submersible Lula1000. A heat pre-treatment and three selective culture media supplemented with different antibiotics were used to promote the selection of Actinobacteria. Sixty-eight actinobacterial strains were isolated from the analyzed samples, being affiliated with the genera Brevibacterium, Tsukamurella, Microbacterium, Micrococcus, Leucobacter, Rhodococcus, Brachybacterium and Streptomyces. Two of these actinobacterial isolates may represent new Microbacterium species as their 16S rRNA gene similarity was below the cut-off value of 98.7%, used to discriminate between species. The crude extracts of the isolated actinobacterial strains were screened for antimicrobial and cytotoxic activities, using the disk diffusion method and MTT assay, respectively. Two actinobacterial strains associated with the genera Brevibacterium and Brachybacterium were active against one or more of the reference strains tested, namely Candida albicans, Bacillus subtilis and Staphylococcus aureus, exhibiting MIC values in the range of 1000 μg mL-1. Cytotoxic assays revealed 23 strains capable of reducing the cellular viability of at least one of the cell lines tested (T47-D, HepG2 and hCMEC/D3). This work contributed to increase the knowledge about the diversity of Actinobacteria associated with deep-sea samples of Portuguese environments and of their bioactive potential. In the future, dereplication of the bioactive extracts will be performed to look for the presence of new bioactive compounds.A resistência aos antibióticos é uma ameaça grave à saúde global, uma vez que o tratamento de um número crescente de infeções bacterianas se tem tornado um problema sério. Adicionalmente, o cancro é responsável pela morte de milhões de pessoas todos os anos e a resistência às terapias existentes é preocupante. As Actinobactérias são produtoras prolíficas de compostos bioativos com aplicações farmacêuticas. A bioprospecção de ambientes não explorados ou sub-explorados, como é o caso do mar profundo, poderá ser a chave para a descoberta de novas moléculas bioativas. Este trabalho teve como foco o estudo da biodiversidade de Actinobactérias cultiváveis associadas a amostras de mar profundo de Portugal, e a investigação do potencial antimicrobiano e citotóxico das estirpes isoladas. Nove amostras de mar profundo, incluindo esponjas, corais e sedimentos, foram recolhidas no Arquipélago da Madeira a profundidades entre os 463 m e 865 m, utilizando o submersível Lula1000. De modo a promover a seleção de Actinobactérias, foi utilizado um pré-tratamento com calor e usados três meios de cultura seletivos suplementados com antibióticos. Foram isoladas 68 estirpes de Actinobactérias a partir das amostras analisadas, afiliadas com os géneros Brevibacterium, Tsukamurella, Microbacterium, Micrococcus, Leucobacter, Rhodococcus, Brachybacterium e Streptomyces. Dois destes isolados actinobacterianos poderão representar novas espécies de Microbacterium, uma vez que a similaridade dos respetivos genes 16S rRNA se encontra abaixo do valor de referência de 98.7%, utilizado para distinguir entre espécies. Os extratos brutos das estirpes de Actinobactérias isoladas foram avaliados quanto às suas atividades antimicrobiana e anticancerígena, utilizando o método de difusão em disco e o ensaio MTT, respetivamente. Duas estirpes de Actinobactérias, associadas aos géneros Brevibacterium e Brachybacterium, tiveram atividade contra uma ou mais estirpes de referência testadas, nomeadamente Candida albicans, Bacillus subtilis e Staphylococcus aureus, exibindo valores de MIC de 1000 μg mL-1. Os ensaios de citotoxicidade revelaram 23 estirpes capazes de reduzir a viabilidade celular de pelo menos uma das linhas celulares testadas (T47-D, HepG2 e hCMEC/D3). Este trabalho contribuiu para aumentar o conhecimento sobre a diversidade de Actinobactérias associadas a amostras de mar profundo em Portugal e o seu potencial bioativo. No futuro, será realizada a desreplicação dos extratos bioativos para procurar novos compostos bioativos.Carvalho, Fátima SilvaAzeredo, JoanaUniversidade do MinhoAmorim, Cláudia Teresa Pinto20212021-01-01T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfhttp://hdl.handle.net/1822/70831eng202619389info:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)instname:Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãoinstacron:RCAAP2023-07-21T12:52:54Zoai:repositorium.sdum.uminho.pt:1822/70831Portal AgregadorONGhttps://www.rcaap.pt/oai/openaireopendoar:71602024-03-19T19:52:08.146976Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos) - Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãofalse
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