Production and characterization of hydrophobins wirh potential for oral medicine applications

• Autor(a) principal: Fernandes, Catarina Fardilha
• Data de Publicação: 2013
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: eng
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10400.14/14793
• topic: Domínio/Área Científica::Engenharia e Tecnologia::Outras Engenharias e Tecnologias; Domínio/Área Científica::Engenharia e Tecnologia::Engenharia Médica

Hidrofobinas são proteínas produzidas apenas por fungos (Ascomycetes e Basidiomycetes) que são capazes de se auto-organizar numa membrana anfipática, na interface, alterando assim a natureza das superfícies. Embora as hidrofobinas de diferentes espécies possuam baixa homologia de sequência, apresentam padrões de hidropatia aproximados, são ricos em cisteína e podem ser distinguidos em duas classes: classe I e classe II. O objectivo geral deste estudo inclui a produção e caracterização de hidrofobinas com potencial uso na medicina oral. Três estirpes, isolados fúngicos L7 e C1.1 da coleção do laboratório, e Bjerkandera sp. BOS55 (L3), também da coleção de laboratório, foram testados a partir da produção de hidrofobinas. A amplificação e sequenciação da zona ITS fúngica permitiram a identificação das espécies L7 e C1.1 isoladas, respectivamente, Mucor circinelloides e Hypocrea lixii (Trichoderma harzianum). As hidrofobinas a partir das três estirpes, foram produzidas, extraídas e ainda caracterizadas. Para a caracterização bioquímica, foi testado o fluido extracelular de todos os isolados para a estabilidade da espuma e o teste de espalhamento de óleo e de tensão superficial. Para todos os isolados a avaliação da hidrofobicidade de conídios foi realizada por suspensão do mesmos e a molhabilidade do micélio foi testada na superfície das hifas. O fluido extracelular do isolado Hypocrea lixii (Trichoderma harzianum) obteve melhor desempenho do que os outros, e também apresentou o micélio mais impermeável, evidenciado no ensaio de molhabilidade da superfície. O Mucor circinelloides foi aquele que exibiu os conídios mais hidrofóbicos. Observações no SEM parecem indicar que todos os isolados possuem hidrofobinas de superfície classe I. Todas as misturas de hidrofobinas obtidas apresentaram alguma atividade antimicrobiana, bem como eficácia na inibição da formação de biofilme de Candida albicans. A caracterização da mistura de hidrofobinas concentradas por HPLC evidenciou dois picos com características hidrofóbicas os quais serão caracterizados em trabalhos futuros. Assim, foi possível isolar hidrofobinas com eficácia na proteção de adesão e crescimento de microrganismos, demonstrando potencial de aplicação na saúde oral.