Culturas de células na presença de um inibidor da respiração mitocondrial

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Silva, Patrícia Alexandra Rocha da
Data de Publicação: 2016
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
Texto Completo: http://hdl.handle.net/10316/35329
Resumo: Trabalho final do 5º ano com vista à atribuição do grau de mestre no âmbito do ciclo de estudos de Mestrado Integrado em Medicina Dentária apresentado à Faculdade de Medicina da Universidade de Coimbra.
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spelling Culturas de células na presença de um inibidor da respiração mitocondrialTrabalho final do 5º ano com vista à atribuição do grau de mestre no âmbito do ciclo de estudos de Mestrado Integrado em Medicina Dentária apresentado à Faculdade de Medicina da Universidade de Coimbra.Introdução: Tumorigénese está dependente da reprogramação do metabolismo celular como consequência de mutações oncogénicas. Uma característica comum do metabolismo das células tumorais é a metabolização da glucose de um modo distinto das células de tecidos normais, onde as células cancerígenas "fermentam" a glicose em lactato, mesmo na presença de oxigénio. Este efeito é referido como efeito de Warbug. O sulfureto de hidrogénio (H2S) é um composto capaz de alterar o metabolismo celular. H2S era reconhecido apenas como um gás com risco ambiental, no entanto este é também sintetizado endogenamente por tecidos de mamíferos. Foi demonstrado que a exposição de murganhos ao gás de H2S resultou numa diminuição da temperatura corporal, assim como uma redução da taxa metabólica, o que foi designado de suspended animation-like state. Objetivo: Este estudo tem como objetivo verificar se o composto Na2S (molécula dadora de H2S) apresenta citotoxicidade a nível da viabilidade celular, quando aplicado em culturas de células numa gama de concentrações de 10 a 100 μg/mL. Materiais e Métodos: Foi utilizada a linha celular osteoblástica MG63. As células foram cultivadas em a-Minimal Essential Medium Eagle (a-MEM, Gibco). Mais tarde, as células foram semeadas em placas de 96 poços, a uma densidade de 104 cells/cm2, e cultivadas durante 24h para permitir a adesão celular. De seguida, o meio de cultura foi descartado e substituído por um meio de cultura contendo o composto Na2S nas concentrações de 10, 25, 50 e 100 μg/mL. As culturas foram mantidas por mais 1 e 4 dias, e caracterizadas relativamente à viabilidade/proliferação celular através do ensaio do MTT. Resultados: A viabilidade/proliferação celular foi avaliada em culturas efetuadas na presença do composto Na2S após 1 e 4 dias de exposição. As células proliferam ao longo do tempo de cultura, apresentando uma elevada taxa de crescimento. Verificou-se que o composto Na2S não apresentou citotoxicidade a nível da viabilidade celular e o comportamento celular foi semelhante ao observado nas culturas controlo. Conclusão: De acordo com o estudo efetuado, concluiu-se que para a gama de concentrações utilizada, o composto Na2S não apresenta citotoxidade. Em trabalhos futuros seria interessante testar este composto noutras culturas celulares e noutra gama de concentrações assim como perceber se este tem capacidade para reduzir o metabolismo celular, permitindo uma futura aplicação terapêutica. Palavras-chave: Metabolismo celular, células tumorais, H2S, citotoxicidade, viabilidade/proliferação celular. Introduction: Tumorigenesis is dependent on the reprogramming of cellular metabolism as consequence of oncogenic mutations. A common feature of cancer cell metabolism is the metabolization of glucose in a different way of normal cells, in which cancer cells "ferment" glucose to lactate, even in the presence of oxygen. This effect is currently stated as the Warburg effect. Hydrogen sulfide (H2S) is a compound capable of altering cellular metabolism. H2S was recognized only as a gas with environmental risk, however it is also synthesized from mammalian tissue. It was shown that the mice exposure to H2S gas resulted in a decrease of body temperature and in a reduction in metabolic rate, this was called suspended animation-like state. Objective: This study aims to determine if the Na2S compound (donor molecule of H2S) shows cytotoxicity related to cell viability when applied to cell cultures at a concentration ranging from 10 to 100 μg/mL. Materials and Methods: To test this, was used the osteoblastic cell line MG63. The cells were in supplemented cultured in a-Minimal Essential Medium Eagle (a-MEM, Gibco). Cells were further seeded in 96 wells at a density of 104cells/cm2 and cultured for 24 hours to allow cell adherence. Then, the culture medium was discarded and replaced with a medium of culture containing the compound Na2S with concentrations of 10, 25, 50 and 100 μg/mL. Cultures were maintained for 1 to 4 days, and characterized with regard to the viability/proliferation using the MTT assay. Results: Viability/proliferation was assessed in cultures exposed to Na2S compound after 1 and 4 days exposure. The cells proliferate during the culture time, with a pattern of high growth rate. It was found that the compound Na2S showed no cytotoxicity related to the cell viability and the cell behavior was similar to that observed in control cultures. Conclusion: According to the study conducted, it was concluded that for the range of concentrations used (10 to 100 μg / ml), the Na2S compound shows no cytotoxicity. In future work, would be interesting to test this compound in other cell cultures and in another concentration range as well as see if it is able to reduce cellular metabolism, allowing for future therapeutic application. Keywords: cell metabolism, cancer cells, H2S, cytotoxicity, cell viability/proliferation.2016-07info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesishttp://hdl.handle.net/10316/35329http://hdl.handle.net/10316/35329porSilva, Patrícia Alexandra Rocha dainfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)instname:Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãoinstacron:RCAAP2022-01-20T17:48:51Zoai:estudogeral.uc.pt:10316/35329Portal AgregadorONGhttps://www.rcaap.pt/oai/openaireopendoar:71602024-03-19T20:45:28.182050Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos) - Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãofalse
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