Propagation and Molecular Characterization of Chlamydia trachomatis strains isolated in Portugal

• Autor(a) principal: CALDEIRA, Ana Rita Serra Valente
• Data de Publicação: 2017
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: eng
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10362/20460
• topic: Ciências biomédicas; Chlamydia trachomatis; Genotipagem ompA; Biologia molecular; Domínio/Área Científica::Ciências Médicas

Chlamydia trachomatis é uma bactéria intracelular que infeta exclusivamente o Homem. Constitui o principal agente etiológico bacteriano de infeções sexualmente transmissíveis e, na ausência de tratamento, pode evoluir para complicações clínicas graves, como a infertilidade tubária. C. trachomatis foi classificada em 15 genótipos, os quais causam preferencialmente infeções oculares (A-C), infeções genitais (D-K) ou linfogranuloma venéreo (LGV) (L1-L3). A tipagem das estirpes de clamídia baseia-se na principal proteína da membrana externa (MOMP) codificada pelo gene ompA. O estudo do genoma de C. trachomatis tem permitido identificar diferenças genéticas entre estirpes; no entanto, os mecanismos de adaptação e virulência não estão ainda bem definidos mas, tal tem sido observado noutras bactérias, podendo decorrer de mecanismos de variação de fase. No presente estudo foi realizada a tipagem de 278 amostras clínicas com base na sequência do gene ompA, através de técnicas de nested-PCR, de sequenciação pelo método de Sanger e de análise de similaridades das sequências obtidas relativamente a sequências de estirpes protótipo de C. trachomatis; tal processo possibilitou identificar variantes genotípicas previamente descritas assim como novas variantes, sugerindo a existência de um contínuo processo de adaptação na bactéria. Os genótipos mais frequentes foram o E, D e F, tal como descrito na maioria dos estudos em populações heterossexuais femininas; contudo um número apreciável (26) de estirpes do genótipo L2 foi igualmente detetado, em particular em amostras anorretais masculinas, o que está igualmente de acordo com o descrito em populações de homens que têm sexo com homens. Tal constatação revela a necessidade de um método de identificação expedita dos genótipos LGV, pelo que contribuímos para a implementação de uma metodologia mais rápida que a tradicional genotipagem-ompA. Pretendemos ainda contribuir para a avaliação da virulência das estirpes de C. trachomatis e para tal, realizamos um estudo preliminar de identificação de potenciais alvos genéticos sujeitos a variação de fase, com recurso à sequenciação de nova geração (NGS). Este estudo constitui um contributo para a vigilância epidemiológica das infeções por C. trachomatis em Portugal, uma situação pouco conhecida, um contributo para a celeridade da identificação de casos de LGV e um contributo para a avaliação da virulência das estirpes de C. trachomatis, pela identificação de alterações em genes potencialmente relacionados com a variação de fase.