O papel da trimetilação da histona H3 na transcrição

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Raposo, Ana Cláudia Bernardino, 1988-
Data de Publicação: 2011
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
Texto Completo: http://hdl.handle.net/10451/6226
Resumo: Tese de mestrado. Biologia (Biologia Molecular e Genética). Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências, 2011
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spelling O papel da trimetilação da histona H3 na transcriçãoBiologia molecularCromatinaDNATranscrição genéticaTeses de mestrado - 2011Tese de mestrado. Biologia (Biologia Molecular e Genética). Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências, 2011Os nucleossomas, unidades básicas da cromatina, formados por um octâmero de histonas em associação com um fragmento de DNA, possuem um papel de extrema importância na regulação de processos biológicos que requerem o acesso ao DNA. Estas estruturas controlam eventos chave durante processos tão distintos como a transcrição, replicação e reparação do DNA. As histonas constituintes dos nucleossomas podem sofrer modificações pós-traducionais, entre as quais se salienta neste estudo a trimetilação da lisina 36 da histona H3 (H3K36me3). Esta modificação está presente nas regiões intragénicas de genes activamente transcritos, sendo a sua presença mais significativa na extremidade 3’ e também nos exões relativamente aos intrões. Tais propriedades demonstram uma relação entre a H3K36me3 e a transcrição, embora o seu papel ainda não seja claro. Neste estudo utilizaram-se metodologias bioquímicas tais como imunoprecipitação da cromatina, western blot e digestão com nucleases para investigar qual o papel exacto desta marca na transcrição em células humanas. Os resultados demonstraram que células com níveis diminuídos de H3K36me3 têm iniciação de transcrição em regiões intragénicas distintas do promotor, o que sugere uma alteração da conformação da cromatina que permite uma maior acessibilidade ao DNA. De facto, experiências adicionais mostraram que perante uma depleção de H3K36me3 a densidade de nucleossomas presentes ao longo dos genes diminui. Por último, verificou-se que a presença desta modificação na histona H3 é necessária para o recrutamento da Spt16, uma proteína envolvida na remontagem dos nucleossomas após a passagem da RNA Polimerase II (RNAPII) na transcrição. Em conjunto, os resultados permitem desenhar um modelo em que a H3K36me3 exerce uma função determinante na manutenção da cromatina numa conformação capaz de suprimir a iniciação da transcrição em regiões intragénicas. Esta função envolve o recrutamento da Spt16 que promove a remontagem dos dímeros H2A-H2B que haviam sido perdidos durante a passagem da RNAPII.Nucleosomes are the basic units of chromatin and consist of a histone octamer in association with a DNA segment. Nucleosomes have an important role in regulating biological processes that require DNA access. These structures influence key events during transcription, replication and DNA repair. Histones present in nucleosomes can have a number of different post-translational modifications. Herein we focus on a specific histone methylation: trimethylation of lysine 36 of histone H3 (H3K36me3). This histone modification is present on intragenic regions of active genes and its levels rise towards the 3’ end of active genes. This modification is also more abundant over exons relative to introns. These properties disclose a link between H3K36me3 and transcription, although the precise role of this mark is not yet understood. Using a biochemical approach, which includes techniques such as chromatin immunoprecipitation, western blot and nuclease digestion assays I aimed at evaluating the role of H3K36me3 during transcription in human cells. The results of these experiments revealed that decreased H3K36me3 levels correlate with increased transcription initiation on intragenic regions. Additional data suggested that this histone mark impacts on chromatin structure promoting a more compact and less accessible conformation. In support of this hypothesis, nuclease digestion assays revealed a decreased density of nucleosomes along the genes in the absence of H3K36me3. Finally, we verified that the presence of this histone mark shepherds Spt16 recruitment to the transcriptional units after RNAPII passage. Spt16 then promotes the deposition of histone H2A-H2B dimmers onto the DNA to reassemble a complete nucleosome and maintain the chromatin integrity. Together, these data allow us to envisage a model in which H3K36me3 suppresses transcription initiation on intragenic regions by signaling the recruitment of Spt16 and the reassembly of histone H2A-H2B ejected during RNAPII elongation.Almeida, Sérgio Fernando deDuarte, JúlioRepositório da Universidade de LisboaRaposo, Ana Cláudia Bernardino, 1988-2012-05-04T14:17:58Z20112011-01-01T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfhttp://hdl.handle.net/10451/6226porinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)instname:Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãoinstacron:RCAAP2023-11-08T15:48:36Zoai:repositorio.ul.pt:10451/6226Portal AgregadorONGhttps://www.rcaap.pt/oai/openaireopendoar:71602024-03-19T21:31:24.526242Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos) - Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãofalse
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