Localização de TNF alfa e Caspase 3 em endométrio de gata no ciclo e no adenocarcinoma do endométrio

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Fontinha, Filipa Margarida Amaral
Data de Publicação: 2016
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
Texto Completo: http://hdl.handle.net/10348/5691
Resumo: As neoplasias uterinas são raras em gatas, representando apenas 0,29% das neoplasias encontradas nesta espécie animal. Apesar de ser considerado um tumor raro, vários estudos têm mostrado a possibilidade do adenocarcinoma do endométrio felino (FEA) poder ser mais frequente do que se pensava. Sendo o endométrio um tecido complexo e dinâmico (devido às suas renovações cíclicas) e sendo controlado por fatores autócrinos e parácrinos, incluindo citocinas, fatores de crescimento e outras moléculas, que são importantes estudar neste órgão. Na gata não há estudos que caracterizem o papel do TNFα e da caspase 3 ativada neste órgão. Este estudo teve como principais objectivos: 1) a avaliação da expressão do TNFα e da caspase 3 ativada, no endométrio normal, dois factores moleculares que podem estar envolvidos na apoptose e proliferação no endométrio dos mamíferos; 2) bem como o estudo comparativo destas duas moléculas com os FEA. Foram usadas para o TNFα 13 amostras na fase estrogénica, 10 na fase progestagénica e 37 FEA, para a Caspase 3 foram usadas 15 amostras na fase estrogénica, 13 na fase progestagénica e 50 adenocarcinomas do endométrio. A imunomarcação foi realizada pela técnica indireta de imunohistoquimica utilizando anticorpos anti- TNFα e anti- caspase 3 ativada. Para a quantificação da marcação destes anticorpos foram avaliados 10 campos na superfície do endométrio e 10 na profundidade, para os animais controlo (em fase estrogénica e progestagénica) e 20 campos nos FEA. A intensidade imunorreacção do TNFα foi avaliada de acordo com uma escala, 0-negativo, 1-fraco, 2-moderado e 3-intenso. Em contraste, para a caspase 3 foram contadas as células em apoptose presentes no campo do microscópio A intensidade de marcação do TNFα no epitélio diminuiu da fase estrogénica para a progestagénica, sendo a intensidade de marcação dos FEA é mais intensa do que esta última fase e sobreponível com a fase estrogénica. No estroma a intensidade de marcação é menor que no epitélio tanto nas fases do ciclo como nos adenocarcinomas. Na avaliação da caspase 3 ativada, no epitélio foram encontradas diferenças significativas entre as fases do ciclo e entre estas e os FEA, apresentando os últimos um número de células em apoptose muito mais elevado que nos tecidos controlo. No estroma verificaram-se diferenças significativas entre as fases do ciclo e os FEA. Nos adenocarcinomas do endométrio não há correlação entre estes dois marcadores, levando-nos a supor que a apoptose aumentada nos FEA poderá não ser induzida por via extrínseca do receptor do TNFα.
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Este estudo teve como principais objectivos: 1) a avaliação da expressão do TNFα e da caspase 3 ativada, no endométrio normal, dois factores moleculares que podem estar envolvidos na apoptose e proliferação no endométrio dos mamíferos; 2) bem como o estudo comparativo destas duas moléculas com os FEA. Foram usadas para o TNFα 13 amostras na fase estrogénica, 10 na fase progestagénica e 37 FEA, para a Caspase 3 foram usadas 15 amostras na fase estrogénica, 13 na fase progestagénica e 50 adenocarcinomas do endométrio. A imunomarcação foi realizada pela técnica indireta de imunohistoquimica utilizando anticorpos anti- TNFα e anti- caspase 3 ativada. Para a quantificação da marcação destes anticorpos foram avaliados 10 campos na superfície do endométrio e 10 na profundidade, para os animais controlo (em fase estrogénica e progestagénica) e 20 campos nos FEA. A intensidade imunorreacção do TNFα foi avaliada de acordo com uma escala, 0-negativo, 1-fraco, 2-moderado e 3-intenso. Em contraste, para a caspase 3 foram contadas as células em apoptose presentes no campo do microscópio A intensidade de marcação do TNFα no epitélio diminuiu da fase estrogénica para a progestagénica, sendo a intensidade de marcação dos FEA é mais intensa do que esta última fase e sobreponível com a fase estrogénica. No estroma a intensidade de marcação é menor que no epitélio tanto nas fases do ciclo como nos adenocarcinomas. Na avaliação da caspase 3 ativada, no epitélio foram encontradas diferenças significativas entre as fases do ciclo e entre estas e os FEA, apresentando os últimos um número de células em apoptose muito mais elevado que nos tecidos controlo. No estroma verificaram-se diferenças significativas entre as fases do ciclo e os FEA. Nos adenocarcinomas do endométrio não há correlação entre estes dois marcadores, levando-nos a supor que a apoptose aumentada nos FEA poderá não ser induzida por via extrínseca do receptor do TNFα.Uterine neoplasms are rare in cats, representing only 0.29 % of all found neoplasms. Although considered a rare tumor, several studies have shown the possibility of feline endometrial adenocarcinoma (FEA) may be more common than originally thought. Being the endometrium a highly complex and dynamic tissue, where cycles of proliferation, secretion and renewal occurs in succession is response to sex steroids, responding to local cyclic changes in molecules, including cytokines, it is of major interest to study growth factors among other molecules to unveil the mechanisms orchestrating such changes and their putative role in pathology. TNFα and activated caspase 3 are two examples for such molecules that aren’t characterized yet in the cat endometrium. Thereby, this study had two main objectives: 1) the evaluation of the TNFα and the activated caspase 3 protein location in normal endometrium, two molecular factors that might be involved in apoptosis and proliferation in the mammal uterus; 2) and the putative changes in these molecules expression in FEA. To achieve these goals, an immunohistochemistry indirect technique was used, with anti TNFα and anti - activated caspase 3 antibodies, For studying TNFα a total of 60 samples were used (13 in estrogenic stage; 10 in progestagenic and 37 of FEA), while for the activated Caspase 3 there were used 78 samples (15 samples in estrogenic and 13 in pragestagenic stages, and 50 of FEA). For quantification of antibody labeling 2 regions of the endometrium were evaluated: 10 fields on the surface and 10 in deep of the endometrium for the normal cyclic stages (estrogen and progestagen; controls) and 20 fields in FEA. Moreover, the intensity of the immunoreaction for TNFα was scored according to the scale 0-negative; 1- faint; 2-moderate; 3 strong intensity. In contrast, for active caspase 3, the number of cells labeled in the total microscopic fields were counted. Overall immunostaining for TNFα decreased in the epithelium of progestagen compared to estrogen stage, but in both control stages the intensity of immunolabeling was increased when compared to FEA, though the differences were not significant. The intensity of immunostaining in the stroma was lower in FEA than for both phases of the cycle and adenocarcinomas. In the evaluation of activated caspase 3 significant differences were observed between the oestrous cycle and FEA, the last one displaying a great increase in the number of apoptotic epithelial cells compared to the cycle samples. In endometrial adenocarcinomas there is no correlation between these two markers, leading us to assume that the increased apoptosis in FEA may not be induced by the extrinsic pathway of the TNF.2016-04-05T17:16:37Z2016-04-05T00:00:00Z2016-04-05info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfhttp://hdl.handle.net/10348/5691porFontinha, Filipa Margarida Amaralinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)instname:Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãoinstacron:RCAAP2024-02-02T12:52:05Zoai:repositorio.utad.pt:10348/5691Portal AgregadorONGhttps://www.rcaap.pt/oai/openaireopendoar:71602024-03-20T02:05:23.017488Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos) - Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãofalse
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