Membrane-active peptides from structural viral proteins : identifying novel delivery vectors for gene therapy

• Autor(a) principal: Flores, Luís Rafael Pereira do Carmo
• Data de Publicação: 2014
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10400.14/15011
• topic: Proteínas estruturais de vírus; Péptidos translocadores de membranas; Administração controlada de fármacos; Terapia génica; Péptidos activos em membranas; Bioquímica física; Structural viral proteins; Cell-penetrating peptides; Drug delivery; Gene therapy; Membrane-active peptides; Physical biochemistry; Domínio/Área Científica::Engenharia e Tecnologia::Outras Engenharias e Tecnologias

Péptidos activos em membranas são relevantes em diversos campos da biomedicina. Os péptidos translocadores de membranas (CPPs), em particular, são promissores na administração de fármacos, incluindo em terapia génica. O presente trabalho teve por objectivo identificar novas sequências CPPs em proteínas estruturais de vírus utilizando técnicas bioinformáticas e validação experimental. 270 proteínas virais foram examinadas para reconhecimento de potenciais CPPs, tendo sido identificadas 2400 sequências putativas. 14 CPPs de vírus foram seleccionados para ensaios in vitro como vectores para carga génica, utilizando oligonucleótidos de ssDNA como modelo. A eficiência de entrega foi monitorizada por espectroscopia de fluorescência, citometria de fluxo e microscopia confocal. Adicionalmente, efectuaram-se ensaios biofísicos para compreender propriedades físico-químicas necessárias para entrega celular eficiente dos CPPs. Consequentemente, medidas de potencial de membrana com di-8-ANEPPS foram utilizados ao estudar afinidade de CPPs para membranas. Foi usado dicroísmo circular para inferir estruturas secundárias induzidas em CPPs por membranas lipídicas. A conjugação entre CPPs de vírus e oligonucleótidos foi também avaliada por dispersão dinâmica de luz para aferir a formação de complexos entre vectores e carga transportada. Seis dos péptidos demonstraram eficiência na entrega de ssDNA a células. Dados biofísicos demonstraram que a eficiência da entrega de CPPs está dependente das interacções entre CPPs e lípidos, assim como da capacidade de conjugação com a carga a transportar. Dois CPPs foram particularmente eficientes e deverão continuar sob desenvolvimento e caracterização. Proteínas estruturais de vírus são uma fonte viável de CPPs, e podem ser exploradas para outras biotecnologias de péptidos activos em membranas, nomeadamente péptidos antimicrobianos.