Alterações genéticas em células isoladas na Síndrome Mielodisplásica

• Autor(a) principal: Reis, Ana Rita de Cadima
• Data de Publicação: 2019
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10773/25434
• topic: Síndrome Mielodisplásica; Citogenética; FACS; FISH; Alterações genéticas; Células isoladas

Introdução: A Síndrome Mielodisplásica (SMD) é um grupo heterogéneo de neoplasias clonais da medula óssea. Embora extremamente complexa, a sua fisiopatologia envolve inúmeros mecanismos genéticos, epigenéticos e mediados pelo sistema imune que levam a uma falha no equilíbrio normal entre a proliferação celular, diferenciação celular e apoptose. É caraterizada por uma hematopoiese ineficaz com alterações na proliferação e diferenciação mieloide das células estaminais hematopoiéticas. Manifesta-se por uma displasia morfológica nas células de diferentes linhas hematopoiéticas, por uma medula óssea normalmente hipercelular e por citopenias periféricas de gravidade variável e que podem progredir para uma leucemia mieloide aguda. As anomalias citogenéticas estão presentes em cerca de 50% dos casos de SMD primária, que incluem: a deleção do braço longo do cromossoma 5 (5q-), deleção do braço longo do cromossoma 7 e monossomia do 7 (-7\7q-), trissomia do 8, deleção do braço longo do cromossoma 20 (20q-) e ausência do cromossoma Y(-Y). Objetivos: Avaliar a presença das alterações cromossómicas acima descritas nas células CD34+ (blastos) purificadas, bem como, nos eritroblastos, células de linha a neutrófilo e monocítica, permitindo perceber melhor o tamanho do clone SMD em cada linha e se este se relacionava com a maior ou menor severidade das citopenias; se uma maior percentagem de células com uma alteração genética ocorria nos subtipos mais graves de SMD (EB1 e EB2) e qual/quais as alterações genéticas que afetavam uma maior percentagem de células. Devido à maior sensibilidade desta estratégia, foi também um objetivo desta tese, identificar quais as alterações genéticas primárias e secundárias em casos com um cariótipo complexo. Metodologia: O grupo de estudo foi constituído por amostras de medula óssea de 30 doentes com diagnóstico de SMD e com pelo menos uma das alterações genéticas acima mencionadas, dos 203 casos estudados e com suspeita de SMD. Pesquisou-se a existência de alterações genéticas por hibridização in situ, por fluorescência (FISH) em diferentes populações celulares purificadas (células CD34+, eritroblastos, monócitos e neutrófilos) por FACS. Resultados: Nos 203 casos com suspeita de SMD, 30 (15%) dos casos apresentavam pelo menos uma alteração cromossómica. Observou-se uma maior percentagem de células CD34+ e de células das diferentes linhas hematopoiéticas estudadas onde se observou a presença de uma determinada alteração genética no subgrupo SMD-EB2. De acordo com os resultados obtidos neste trabalho, apenas 5 dos 30 casos analisados apresentavam mais do que uma alteração genética. Nestes, e com base na percentagem de células afetadas, os resultados sugerem que a 5q-, 7q- e -Y parecem corresponder a alterações genéticas primárias e a 20q- e +8 a secundárias. Neste estudo não se observou qualquer relação entre a percentagem de células afetadas (com uma alteração genética) de uma determinada linha e o grau da citopenia. Conclusão: Demonstrou-se a importância da realização do estudo das alterações genéticas por FISH principalmente em células CD34+ purificadas, permitindo obter uma maior sensibilidade na deteção dessas mesmas alterações genéticas, ter uma ideia do tamanho do clone SMD nessas células e da hematopoiese displásica e, por outro lado, perceber quais foram as alterações genéticas primária e secundárias em casos de cariótipo complexo.