The use of 3D cellular models for genotoxicity studies.

• Autor(a) principal: Carradinha, Margarida Miranda
• Data de Publicação: 2023
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10400.26/48710
• topic: Cultura Celular 2D; Cultura Celular 3D; Genotoxicidade; Comet Assay; Esferóides; 2D Cell Culture; 3D Cell Culture; Genotoxicity; Spheroids

O desenvolvimento de ensaios de genotoxicidade envolve várias etapas, tendo inicio nas metodologias in vitro, seguido por in vivo, até ser passível a translação para seres humanos. O principal objetivo deste projeto foi comparar a resposta genotóxica das linhas celulares 2D (bidimensionais) com os modelos celulares tridimensionais (3D). Para ambos os modelos, utilizaram-se as mesmas linhas celulares de mama (tumorais e não tumorais: MCF-7 e MCF- 10A). A implementação de esferoides 3D foi realizada com sucesso utilizando as linhas celulares de mama MCF-7 e MCF-10A. O próximo passo foi o desenvolvimento de ensaios de genotoxicidade em modelos esferoidais. Neste projeto, recorreu-se ao Comet Assay, também conhecido como ensaio de eletroforese em gel de célula única. De forma a validar este ensaio em modelos 3D, foram realizadas experiências com vista a analisar e comparar as diferenças nos resultados obtidos para os modelos de cultura 2D e 3D. O Comet Assay permitiu avaliar a resposta celular da exposição a agentes químicos indutores de lesões no DNA, sendo que o tamanho da cauda pode ser diretamente correlacionado a uma maior lesão no DNA celular. Para a induções de lesões no DNA, recorreu-se ao uso da doxorrubicina (DOX), um agente quimioterapêutico utilizado no tratamento do cancro. O controlo positivo utilizado neste estudo foi o peróxido de hidrogénio (H2O2). Os resultados revelaram que, para ambas as linhas celulares e ambos os agentes (DOX e H2O2), os modelos 2D exibem níveis mais altos de lesão no DNA em comparação com seus equivalentes em 3D. Esta disparidade é particularmente pronunciada na linha celular MCF- 10A. No entanto, ensaios adicionais e complementares devem ser realizados, sendo indispensáveis para avaliar a reprodutibilidade e a significância estatística dos resultados obtidos. Com este estudo concluiu-se que a validação do uso do Comet Assay para modelos esferoidais 3D necessita ser mais profundamente estudada, incluindo a caracterização fenotípica e morfológica dos esferoides.