Determinação do sexo através da análise proteómica do esmalte dentário em cães (Canis lupus familiaris) para aplicação a amostras zooarqueológicas

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Conde, Ana Cristina Bernardo Valente
Data de Publicação: 2023
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
Texto Completo: http://hdl.handle.net/10348/11966
Resumo: A determinação do sexo de um animal pode ser realizada a partir de amostras do esqueleto, com recurso a métodos morfológicos, genómicos e proteómicos. Os métodos morfológicos aplicados à análise da pélvis ou do crânio são abordagens possíveis. Apesar de haver dimorfismo sexual na espécie canina (machos com maiores dimensões do que as fêmeas), as dimensões variam significativamente entre raças. Além disso, as diferenças entre indivíduos tornam-se acentuadas no período pós-púbere, pelo que, antes desse momento, a utilização deste método revela-se pouco fidedigna. Os métodos genómicos estão disponíveis e têm revelado resultados promissores. As amostras utilizadas podem ser diversas e através de técnicas moleculares de amplificação do locus-alvo, como a reação em cadeia da polimerase (PCR), por exemplo, é possível amplificar pequenas quantidades de ADN de genes específicos, como o gene SRY, onde se localiza a região determinante do sexo masculino (Y). Não obstante, é um método dispendioso, moroso, sujeito a contaminação e que por vezes falha devido à qualidade do ADN remanescente. A metodologia proteómica apresenta-se útil para a determinação do sexo, sobretudo em restos arqueológicos, na medida em que a estrutura molecular das proteínas conserva-se melhor do que a do ADN (apesar de também sofrerem degradação), mas também pela possibilidade de ser aplicada a animais jovens utilizando estruturas como o esmalte, que é bastante duro e, portanto, preserva-se durante longos períodos. O presente projeto tem como objetivo desenvolver a metodologia de determinação do sexo no cão a partir do esmalte dentário. Com recurso à metodologia proteómica e a partir de amostras cujo sexo é conhecido, estudar-se-ão as isoformas AMELX e AMELY, amelogeninas no esmalte dentário que são codificadas por alelos localizados nos cromossomas sexuais. Posteriormente, recorrer-se-á à microscopia eletrónica de varrimento para avaliar se a metodologia preserva a superfície onde será feita a extração. Este estudo permitirá perceber se a aplicação da metodologia proteómica a amostras zooarqueológicas tem vantagens em relação à genómica, atualmente utilizada. Contribuirá ainda para o conhecimento útil a outras disciplinas, como a Medicina Veterinária Forense e possibilitará futuras investigações nestas áreas.
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As amostras utilizadas podem ser diversas e através de técnicas moleculares de amplificação do locus-alvo, como a reação em cadeia da polimerase (PCR), por exemplo, é possível amplificar pequenas quantidades de ADN de genes específicos, como o gene SRY, onde se localiza a região determinante do sexo masculino (Y). Não obstante, é um método dispendioso, moroso, sujeito a contaminação e que por vezes falha devido à qualidade do ADN remanescente. A metodologia proteómica apresenta-se útil para a determinação do sexo, sobretudo em restos arqueológicos, na medida em que a estrutura molecular das proteínas conserva-se melhor do que a do ADN (apesar de também sofrerem degradação), mas também pela possibilidade de ser aplicada a animais jovens utilizando estruturas como o esmalte, que é bastante duro e, portanto, preserva-se durante longos períodos. O presente projeto tem como objetivo desenvolver a metodologia de determinação do sexo no cão a partir do esmalte dentário. Com recurso à metodologia proteómica e a partir de amostras cujo sexo é conhecido, estudar-se-ão as isoformas AMELX e AMELY, amelogeninas no esmalte dentário que são codificadas por alelos localizados nos cromossomas sexuais. Posteriormente, recorrer-se-á à microscopia eletrónica de varrimento para avaliar se a metodologia preserva a superfície onde será feita a extração. Este estudo permitirá perceber se a aplicação da metodologia proteómica a amostras zooarqueológicas tem vantagens em relação à genómica, atualmente utilizada. Contribuirá ainda para o conhecimento útil a outras disciplinas, como a Medicina Veterinária Forense e possibilitará futuras investigações nestas áreas.The determination of the sex of an animal can be performed from samples of the skeleton using morphological, genomic and proteomic methods. The morphological methods applied to the analysis of the pelvis or the skull are possible approaches. Although there is sexual dimorphism in the canine species (males with larger dimensions than females), dimensions vary significantly between breeds. Furthermore, the differences between individuals become accentuated in the postpubertal period, so that, before that moment, the use of this method proves to be unreliable. Genomic methods are available and have shown promising results. The samples used can be diverse and through molecular techniques of amplification of the target locus, such as the polymerase chain reaction (PCR), for example, it is possible to amplify small amounts of DNA from specific genes, such as the SRY gene, where locates the male-determining region (Y). However, it is an expensive, time-consuming method, subject to contamination and that sometimes fails due to the quality of the remaining DNA. The proteomics methodology is useful for sex determination, especially in archaeological remains, insofar as the molecular structure of proteins is better preserved than that of DNA (although they also undergo degradation), but also because of the possibility of being applied to young animals using structures such as enamel, which is quite hard and, therefore, is preserved for long periods. The present project aims to develop the methodology of sex determination in dogs from tooth enamel. Using proteomics methodology and from samples whose sex is known, the isoforms AMELX and AMELY will be studied, amelogenins in dental enamel that are encoded by alleles located in the sex chromosomes. Subsequently, scanning electron microscopy will be used to assess whether the methodology preserves the surface where the extraction will be performed. This study will allow us to understand whether the application of proteomics methodology to zooarchaeological samples has advantages over genomics, currently used. It will also contribute to knowledge useful to other disciplines, such as Forensic Veterinary Medicine and will enable future investigations in these areas.2023-11-23T15:58:21Z2023-02-06T00:00:00Z2023-02-06info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfapplication/pdfapplication/pdfhttp://hdl.handle.net/10348/11966pormetadata only accessinfo:eu-repo/semantics/openAccessConde, Ana Cristina Bernardo Valentereponame:Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)instname:Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãoinstacron:RCAAP2024-02-02T12:59:26Zoai:repositorio.utad.pt:10348/11966Portal AgregadorONGhttps://www.rcaap.pt/oai/openaireopendoar:71602024-03-20T02:07:00.697412Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos) - Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãofalse
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