Caracterização da interacção proteica Hairy1: Brachyury no desenvolvimento do embrião de galinha

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Amaro, Joana Paula Gomes, 1988-
Data de Publicação: 2012
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
Texto Completo: http://hdl.handle.net/10451/7249
Resumo: Tese de mestrado.Biologia (Biologia Evolutiva e do desenvolvimento), Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências, 2012
id RCAP_63f2c837b1c3f94c8aef8ae670fc8823
oai_identifier_str oai:repositorio.ul.pt:10451/7249
network_acronym_str RCAP
network_name_str Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
repository_id_str 7160
spelling Caracterização da interacção proteica Hairy1: Brachyury no desenvolvimento do embrião de galinhaEmbriologia animalBiologia celularTeses de mestrado - 2012Tese de mestrado.Biologia (Biologia Evolutiva e do desenvolvimento), Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências, 2012A somitogénese é um processo característico do desenvolvimento embrionário dos vertebrados durante o qual segmentos repetidos, denominados somitos, são gerados de forma periódica, sob o controlo temporal imprimido por um Relógio Molecular, primeiramente descrito pela expressão cíclica do gene hairy1. O nosso laboratório identificou uma interacção proteica entre Hairy1 e Brachyury (T), um marcador de identidade mesodérmica. T regula e é regulado pela sinalização FGF e desempenha um papel fundamental na activação da expressão dos genes de identidade Hox. Este resultado levantou a hipótese de que Hairy1 e T interagem ao longo do desenvolvimento, aliando informação temporal e posicional. Para prosseguir o estudo desta hipótese, neste trabalho realizou-se a caracterização da interacção proteica entre Hairy1 e T in vivo por Bimolecular Fluorescent Complementation (BiFC), identificando a sua localização subcelular e os domínios proteicos envolvidos. Os resultados mostram que o dímero T:Hairy1 é exclusivamente nuclear, que a homodimerização de Hairy1 ocorre no núcleo e no citoplasma, e sugerem que a porção bHLHOR é suficiente para estas interacções. Os padrões de expressão de hairy1 e T apresentam domínios de co-expressão ao longo do desenvolvimento, corroborando um possivel papel funcional para a interacção entre as duas proteínas. Observou-se que a expressão de T apresenta um gradiente de mRNA na mesoderme pré-somitica (PSM), sendo que o seu dominio de transcrição activa se revelou mais restrito ao botão caudal, assim como foi descrito para fgf8. A caracterização da dinâmica temporal da expressão de T e fgf8 revelou que estes genes apresentam pulsos de transcrição, com periodicidade diferente de 90min. Verificou-se ainda que a ausência da notocorda por 90min e 4,5h, provoca uma diminuição da transcrição e da expressão de mRNA maduro em T e fgf8, sendo mais acentuada para fgf8. Globalmente, estes resultados sugerem que T e fgf8 possuem mecanismos de regulação da expressão na PSM muito semelhantes.Somitogenesis is a characteristic process of vertebrate embryo development whereby repeated segments, called somites, are generated with a tight temporal control dictated by a Molecular Clock, primarily described by hairy1 gene expression oscillations. Our lab found that Hairy1 protein interacts with the mesoderm marker Brachyury (T). T is involved in a positive feed-back loop with FGF signaling and plays a fundamental role on Hox gene expression activation. This raised the hypothesis that Hairy1 and T may interact throughout development, linking temporal and positional information. To pursue studying this hypothesis, in this work we performed the characterization of Hairy1 and T protein interaction in vivo by Bimolecular Fluorescent Complementation (BiFC), identifying its subcelular localization and the protein domains involved. Our results show that the T:Hairy1 dimer is exclusively nuclear, that Hairy1 homodimeriziation occurs in both nucleus and cytoplasm, and that the bHLHOR portion of Hairy1 is sufficient for these interactions to occur. hairy1 and T reveal domains of co-expression during development, supporting a functional role for the interaction among their proteins. We found that T expression presents a mRNA gradient in the pre-somitic mesoderm (PSM) and that its transcription domain appeared more restricted to the tail bud, as previously described for fgf8. Characterization of the temporal dynamics of T and fgf8 expression showed that both genes present transcriptional pulses, with a periodicity that differs from 90min. Additionally, we observed that notochord ablation for 90min and 4,5h resulted in a decrease of transcription and mature mRNA expression of both T and fgf8, although to greater extent for fgf8. Overall, our results evidence that T and fgf8 seem to share similar regulatory gene expression mechanisms in the chick PSM.Andrade, Raquel P.Martins, GabrielRepositório da Universidade de LisboaAmaro, Joana Paula Gomes, 1988-2012-11-19T18:01:23Z20122012-01-01T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfhttp://hdl.handle.net/10451/7249porinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)instname:Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãoinstacron:RCAAP2023-11-08T15:50:18Zoai:repositorio.ul.pt:10451/7249Portal AgregadorONGhttps://www.rcaap.pt/oai/openaireopendoar:71602024-03-19T21:32:07.121219Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos) - Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãofalse
dc.title.none.fl_str_mv Caracterização da interacção proteica Hairy1: Brachyury no desenvolvimento do embrião de galinha
title Caracterização da interacção proteica Hairy1: Brachyury no desenvolvimento do embrião de galinha
spellingShingle Caracterização da interacção proteica Hairy1: Brachyury no desenvolvimento do embrião de galinha
Amaro, Joana Paula Gomes, 1988-
Embriologia animal
Biologia celular
Teses de mestrado - 2012
title_short Caracterização da interacção proteica Hairy1: Brachyury no desenvolvimento do embrião de galinha
title_full Caracterização da interacção proteica Hairy1: Brachyury no desenvolvimento do embrião de galinha
title_fullStr Caracterização da interacção proteica Hairy1: Brachyury no desenvolvimento do embrião de galinha
title_full_unstemmed Caracterização da interacção proteica Hairy1: Brachyury no desenvolvimento do embrião de galinha
title_sort Caracterização da interacção proteica Hairy1: Brachyury no desenvolvimento do embrião de galinha
author Amaro, Joana Paula Gomes, 1988-
author_facet Amaro, Joana Paula Gomes, 1988-
author_role author
dc.contributor.none.fl_str_mv Andrade, Raquel P.
Martins, Gabriel
Repositório da Universidade de Lisboa
dc.contributor.author.fl_str_mv Amaro, Joana Paula Gomes, 1988-
dc.subject.por.fl_str_mv Embriologia animal
Biologia celular
Teses de mestrado - 2012
topic Embriologia animal
Biologia celular
Teses de mestrado - 2012
description Tese de mestrado.Biologia (Biologia Evolutiva e do desenvolvimento), Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências, 2012
publishDate 2012
dc.date.none.fl_str_mv 2012-11-19T18:01:23Z
2012
2012-01-01T00:00:00Z
dc.type.status.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/publishedVersion
dc.type.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/masterThesis
format masterThesis
status_str publishedVersion
dc.identifier.uri.fl_str_mv http://hdl.handle.net/10451/7249
url http://hdl.handle.net/10451/7249
dc.language.iso.fl_str_mv por
language por
dc.rights.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/openAccess
eu_rights_str_mv openAccess
dc.format.none.fl_str_mv application/pdf
dc.source.none.fl_str_mv reponame:Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
instname:Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informação
instacron:RCAAP
instname_str Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informação
instacron_str RCAAP
institution RCAAP
reponame_str Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
collection Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
repository.name.fl_str_mv Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos) - Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informação
repository.mail.fl_str_mv
_version_ 1799134212167565312

Registros relacionados