Canine lymphoma immunophenotype prevalence and predisposition and evaluation of SN38 to be used in an antibody-drug conjugate for B-cell lymphoma treatment

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Santos, Filipe Miguel Barão dos
Data de Publicação: 2021
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: eng
Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
Texto Completo: http://hdl.handle.net/10400.5/21061
Resumo: Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina Veterinária
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spelling Canine lymphoma immunophenotype prevalence and predisposition and evaluation of SN38 to be used in an antibody-drug conjugate for B-cell lymphoma treatmentLymphomaimmunophenotypeADCsSN38single-domain antibodiesLinfomaimunofenótipoADCsSN38anticorpos de domínio únicoDissertação de Mestrado Integrado em Medicina VeterináriaLymphoma is one of the most diagnosed neoplasias in dogs and one of the most recurring in clinical practice. This disease features various immunophenotypes, clinical and anatomopathological presentations, being the B-cell lymphoma the most reported in literature. In this species, lymphoma is similar to non-Hodgkin human lymphoma regarding therapy response, immunophenotype and anatomopathological presentation. Therefore, the dog is a very good spontaneous model for comparative studies. In this way, a statistical study was conducted in order to investigate the frequency for each immunophenotype and a possible breed predisposition for them, in comparison with previous studies. The sample included 165 records of canine lymphoma cases from 36 breeds kept by the Laboratory of Pathological Anatomy of the Faculty of Veterinary Medicine in the last 7 years with an immunohistochemistry diagnosis. Hitherto, conventional therapy comprises chemotherapy, corticotherapy and radiotherapy. However, these approaches have their limitations. This arises the need for novel therapies. Amongst those, immunotherapy with antibody-drug conjugates (ADCs) stands out since they allow for a more specific and directed therapy with less side effects. Given the promising potential of these strategies, the aim of this project consisted in contributing to the development of an ADC through the cloning of previously selected single-domain antibodies (sdAbs) in a pET21a vector for large-scale production and the validation of SN38 as a cytotoxic drug to link to these antibodies. The final aim was the ADC therapeutic application in canine B-cell lymphoma. Making use of descriptive statistics and Fisher’s exact tests, the obtained results confirmed a large majority of B-cell lymphoma cases (72.7%) but, contrarily to previous studies, an association with lymphoma immunophenotype was not found in the majority of the studied breeds. These results are not very statistically reliable, due to the small sample population. The cell viability assays performed with SN38 in two B-cell lymphoma lines, a canine lymphoma (CLBL-1) and a human lymphoma cell line (Raji), disclosed IC50 ranging between 4 to 300 nM, promising results which reinforce the importance in investing in more studies in order to obtain more data that can validate this compound for canine lymphoma therapy.ABSTRACT - Predisposição e prevalência de imunofenótipos do linfoma canino e avaliação do SN38 para utilização num imunoconjugado para tratamento do linfoma de células B - O linfoma é uma das neoplasias mais diagnosticada em cães e uma das mais recorrentes na prática clínica. Esta doença apresenta vários imunofenótipos e apresentações clínicas e anatomopatológicas, sendo o linfoma de células B o mais registado na literatura. Nesta espécie, o linfoma assemelha-se ao linfoma não-Hodgkin no Homem, nomeadamente na resposta à terapia, imunofenótipo e apresentação anatomopatológica. Assim, o cão apresenta-se como um excelente modelo espontâneo de estudos comparativos com o Homem. Desta forma, foi efectuado um estudo estatístico de forma a averiguar a frequência de cada imunofenótipo e uma possível predisposição de raça para os mesmos em comparação com estudos anteriores. A amostra incluiu 165 registos de casos de linfoma canino de 36 raças mantidos pelo Laboratório de Anatomia Patológica da Faculdade de Medicina Veterinária nos últimos 7 anos com diagnóstico imunohistoquímico. Até à data, a terapêutica convencional para o linfoma resume-se à terapêutica com anti-neoplásicos, à corticoterapia e à radioterapia. Contudo, estas abordagens têm limitações. Atendendo a estas adversidades, surge a necessidade de novas terapias. Destas, destaca-se a imunoterapia com anticorpos conjugados com fármacos citotóxicos (ADCs) que permitem uma terapia mais específica e direccionada, com menos efeitos adversos. Dado o potencial promissor destas estratégias, este trabalho teve como objectivo contribuir para o desenvolvimento de um ADC através da clonagem de anticorpos de domínio único (sdAbs), previamente seleccionados, num vector pET21a para produção em larga escala e validação do SN38 como composto citotóxico para ligação a estes anticorpos, tendo em vista a sua aplicação terapêutica em linfoma canino de células B. Com recurso a estatística descritiva e testes exactos de Fisher, os resultados obtidos confirmaram uma larga maioria de casos de linfoma de células B (72,7%), mas, contrariamente a estudos prévios, não se encontrou uma associação com imunofenótipo na maioria das raças estudadas, resultados estes estatisticamente pouco significativos devido à pequena amostra do estudo. Os ensaios de viabilidade celular realizados com o SN38 em duas linhas celulares de linfoma de células B, uma de linfoma canino (CLBL-1) e outra de linfoma humano (Raji), revelaram valores de IC50 na ordem dos 4 a 300 nM, resultados promissores que reforçam a importância de investir em mais estudos de forma a obter mais dados que possibilitem validar este composto na terapêutica do linfoma canino.Universidade de Lisboa, Faculdade de Medicina VeterináriaSilva, Frederico Nuno Castanheira Aires daSolange Judite Roque Coelho Alves Gil NevesRepositório da Universidade de LisboaSantos, Filipe Miguel Barão dos2022-01-25T01:30:17Z2021-01-252021-01-25T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfhttp://hdl.handle.net/10400.5/21061TID:202718131engSantos FMB 2021. Canine lymphoma immunophenotype prevalence and predisposition and evaluation of SN38 to be used in an antibody-drug conjugate for B-cell lymphoma treatment [dissertação de mestrado]. 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