Uma abordagem epigenética à determinação da idade de amostras biológicas: potenciais aplicações forenses

• Autor(a) principal: Vale, Sílvia Daniela Costa
• Data de Publicação: 2016
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10773/22398
• topic: Genética forense; Epigenética

Ao longo do tempo de vida, um processo estocástico influenciado pela hereditariedade, fatores ambientais, estilo de vida e doenças conduz a alterações graduais de biomoléculas ao nível molecular e celular – o envelhecimento. Estas alterações podem auxiliar em investigações forenses na determinação da idade de indivíduos e, respetiva identificação, por métodos morfológicos, bioquímicos e moleculares. Contudo, estes marcadores biológicos possuem baixa precisão na estimativa da idade e inúmeras limitações práticas. Uma das modificações epigenéticas que está amplamente correlacionada com a idade é a metilação do ADN, uma vez que os níveis de metilação globais diminuem ao longo do envelhecimento. Desta forma, foram analisados os padrões de metilação de promotores de genes, no sentido de criar um modelo robusto de previsão da idade. Neste estudo, avaliamos a introdução de uma nova abordagem na análise do estado de metilação de três loci (EDARADD, NPTX2 e TOM1L1) – a High-Resolution melting. Inicialmente, foi realizada uma otimização desta metodologia, pela avaliação dos métodos de extração do ADN e dos kits de conversão testados. Estas etapas revelaram ser fatores-chave para a correta análise dos padrões de metilação por HRM num conjunto de amostras estudadas. Esta metodologia permitiu diferenciar as amostras, segundo o estado de metilação dos referidos marcadores, em grupos etários, revelando alguma imprecisão desta técnica para a estimativa da idade. Por último, foi avaliada a metilação global de ADN genómico de uma pequena amostragem, na qual se comprovou a sua diminuição durante o processo de envelhecimento.