Desenvolvimento de um biossensor para hemoglobina

• Autor(a) principal: Moreira, Ana Patrícia Tavares
• Data de Publicação: 2013
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10400.22/10585
• topic: Impressão molecular em superfície; Sensor; Hemoglobina; Potenciométrica; Elétrodos seletivos de ião; Surface molecular imprint; Hemoglobin; Potentiometry; Ion-selective electrodes

O presente trabalho descreve a preparação um anticorpo plástico (MIP, do inglês Molecularly Imprinted Polymer), i.e., de natureza sintética para deteção de hemoglobina (Hb) e sua aplicação na construção de dispositivos de pequena dimensão, portáteis, e de baixo custo, que possam ser usados em análises de rotina de Hb em Point-of-Care (POC). O polímero impresso foi obtido por polimerização de superfície em esferas de sílica. Este processo foi iniciado pela ligação covalente da Hb às esferas, tendo-se permitido posteriormente a sua interação os monómeros carregados (cloridrato de metacrilato de 2-aminoetil, AEMH, e estireno sulfónico, (SSA), para subsequente polimerização com material neutro, como o estireno e divinilbenzeno (DVB). Por último, a Hb foi removida por clivagem de ligações peptídicas, através da atuação de proteinase K. Para controlo da eficiência da impressão da Hb no material sintético foi dimensionado um material análogo, obtido sem adição de proteína e aqui identificado por NIP (do inglês, Non-Imprinted Polymer). Para controlo do efeito dos monómeros carregados na afinidade de ligação entre a Hb e o seu anticorpo plástico, foram preparados materiais análogos onde o local de ligação foi dimensionado sem monómeros carregados. Todos os materiais produzidos foram utilizados na preparação de sensores potenciométricos e comparados relativamente à sua afinidade e seletividade de ligação à Hb, por avaliação e comparação do desempenho analítico destes dispositivos. Os materiais NIP não foram capazes e gerar sinal analítico na presença de Hb, confirmando a existência de locais específicos para ligação desta proteína nos anticorpos plásticos MIP. O reconhecimento da estereoquímica da Hb foi confirmado pela ausência da capacidade de ligação dos materiais não-impressos, os Nipas, obtidos por impressão sem molécula molde. A análise por microscopia electrónica de arrimento confirmou a modificação da superfície das partículas de sílica. O material bio mimético foi disperso em membranas seletivas PVC plastificado e usado na deteção de Hb na transdução potenciométrica. Algumas membranas apresentaram uma elevada afinidade para a Hb, adquirindo a sua cor vermelha após várias calibrações. A presença de Hb nestas membranas foi confirmada por remoção da membrana do corpo do elétrodo e sua utilização em realização de estudos qualitativos com base em técnicas de Infravermelho com ransformada da Fourier, microscopia ótica e microscopia confocal de Raman. As melhores características de resposta foram obtidas em tampão HEPES de pH 5, com as membranas MMA. Sob esta condição, os limites de deteção foram 43,8μg/mL, com uma resposta linear a 83,8 µg/mL, com uma inclinação catiónico de 40,4 mV / década. A aplicação analítica foi realizada com sucesso e mostrou resultados exactos e precisos.