Evaluating the effects of Abeta using a synaptosomal model

• Autor(a) principal: Tenreiro, Ana Patrícia da Fonseca
• Data de Publicação: 2012
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: eng
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10773/9535
• topic: Biomedicina; Doença de Alzheimer; Proteínas; Fosforilação; Fosfatases

A Doença de Alzheimer (DA) é uma doença neurodegenerativa caracterizada pela presença de placas senis extracelulares (PSs), compostas principalmente pelo péptido Abeta, pelas tranças neurofibrilhares intracelulares (TNFs) compostas pela Tau hiperfosforilada, e pela disfunção sináptica. Assim, na DA estão envolvidas proteínas cuja expressão está alterada como a proteína precursora de amilóide de Alzheimer (PPA) e Tau, sendo a análise proteómica destas proteínas de grande importância para o estudo da patologia em questão. A possibilidade de estudar a sinapse, assim como o seu conteúdo proteico através dos sinaptossomas constitui um modelo muito atrativo, uma vez que as suas características morfológicas e funcionais são preservadas após o isolamento. No presente estudo, foram testadas duas metodologias distintas para isolar sinaptossomas, o protocolo de gradiente de Percoll e o protocolo de gradiente de sacarose. Da análise bioquímica desses protocolos verificou-se que o protocolo de gradiente de sacarose é mais eficiente, tendo sido aplicado nos diferentes ensaios realizados. De modo a avaliar os efeitos do Abeta na fosforilação anormal de proteínas envolvidas na DA, neste estudo foram analisados os efeitos do Abeta na fosforilação da PPA e Tau, nos resíduos Thr668 e Ser262, respectivamente. Verificou-se que nas fracções sinaptossomais de córtex e hipocampo o Abeta provoca um aumento da fosforilação da PPA e da Tau nos resíduos em estudo, principalmente nas concentrações mais elevadas. Adicionalmente, e sabendo que a DA pode resultar do mau funcionamento de proteínas cinases e fosfatases, que podem levar à desregulação de vias de transdução de sinal, é também importante determinar quais dessas cinases e fosfatases estão envolvidas na desfosforilação dos resíduos Thr668 na PPA e Ser262 na Tau. Neste estudo, através da utilização de inibidores de fosfatases, o ácido ocadeico (AO) e a cantaridina (CT), observou-se um envolvimento da PP1 na desfosforilação da PPA e da Tau. No seu conjunto, os resultados obtidos sugerem que o Abeta pode estar envolvido na alteração de vias de sinalização que culminam na Doença de Alzheimer.