Caracterização molecular de estirpes de Aeromonas spp. resistentes a antibióticos beta-lactâmicos

• Autor(a) principal: Tacão, Marta Cristina Oliveira Martins
• Data de Publicação: 2003
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10773/21408
• topic: Aeromonas; Microbiologia molecular; Beta lactamases; Microorganismos patogénicos - Resistência a antibióticos

Estudos feitos em todo o mundo têm demonstrado que Aeromonas spp. estão distribuídas universalmente e podem ser isoladas de amostras clínicas, alimentares e ambientais. São exemplo de microrganismos patogénicos emergentes. Em sistemas de aquacultura, as infecções bacterianas são a causa principal das quebras de produtividade. O uso intensivo de antibióticos beta-lactâmicos como agentes terapêuticos levou ao aparecimento de estirpes multiresistentes. Neste trabalho, foram analisadas estirpes de Aeromonas isoladas de amostras de tecido da pele e rins de trutas arco-íris (Oncorhynchus mykiss) de uma aquacultura da Universidade de Trás-os-Montes e Alto Douro. Foram incluídas também estirpes de referência. Os testes de susceptibilidade a antibióticos beta-lactâmicos revelaram que a maior parte dos isolados é resistente a penicilinas e cefalosporinas de 1ª geração. Em 7 isolados foi detectada resistência a carbapenemos (imipenemo). Por forma a caracterizar o mecanismo de resistência dos isolados resistentes ao imipenemo, foram desenhados "primers" para amplificar por PCR genes de resistência homólogos a cphA e/ou imiS, que codificam as metalo-beta-lactamases CphA e ImiS, já descritas em Aeromonas spp.. Em 5 dos isolados e em 2 estirpes referência, foi possível amplificar por PCR, com os "primers" desenhados, Aer- R e Aer-F, um fragmento com o tamanho esperado, cerca de 670 pb, a partir do DNA total das estirpes de Aeromonas spp.. A análise das sequências nucleotídicas e das sequências de aminoácidos deduzidas revelou tratarem-se de fragmentos de DNA de genes homólogos a cphA/imiS, que codificam para metalo-beta-lactamases de classe B, subclasse B2. Procedeu-se também à detecção de sequências homólogas por hibridação DNA-DNA, usando uma sonda marcada por PCR com os "primers" Aer-R e Aer-F. Ocorreu hibridação entre o fragmento de DNA usado como sonda e o DNA de todos os isolados que apresentavam actividade de carbapenemase. Pretendeu-se, também, caracterizar os isolados ao nível molecular, através de técnicas de tipagem genética como ARDRA e rep-PCR. Os perfis ARDRA obtidos por digestão com MboI e AluI permitiram identificar os isolados como Aeromonas bestiarum Aeromonas hydrophila e Aeromonas media. Os perfis REP- e BOX-PCR resultantes mostraram-se mais complexos que os perfis ARDRA e permitiram avaliar o grau de diversidade genómica dos isolados, mostrando-se úteis na tipagem genética de isolados deste grupo de procariotas.