Estudo do efeito de radiação ionizante em metaloproteínas que ligam DNA

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Silva, Daniela Penas da
Data de Publicação: 2011
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
Texto Completo: http://hdl.handle.net/10362/6313
Resumo: Dissertação para obtenção do Grau de Mestre em Biotecnologia
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spelling Estudo do efeito de radiação ionizante em metaloproteínas que ligam DNADissertação para obtenção do Grau de Mestre em BiotecnologiaA integridade do DNA na célula está sob constante ameaça de agentes nocivos de origem endógena e exógena. As lesões provocadas no DNA, já bem conhecidas, podem levar à modificação das bases do DNA ou podem causar alterações químicas devido à formação de espécies reactivas de oxigénio. Consequentemente as células desenvolveram sistemas sofisticados de reparação do DNA que corrigem a grande maioria das lesões. O tipo de interacção/efeito pela radiação UV ou espécies reactivas de oxigénio em proteínas que interagem com o DNA, tais como as proteínas da família dos zinc finger, não é bem conhecido. O objectivo principal deste trabalho é avaliar o efeito da radiação em proteínas com o domínio zinc finger clássico/C2H2, envolvidos na reparação do DNA, utilizando a proteína GAGA-DBD para o estudo, uma vez que esta possui apenas um domínio. Deste modo, produziu-se a proteína GAGA-DBD em Escherichia coli de uma forma solúvel, com rendimento de 6,5 mg/L de cultura. A proteína recombinante foi caracterizada bioquímica e espectoscopicamente, tendo-se determinado um coeficiente de extinção molar a 280 nm igual a 1060 M-1cm-1 e a constante de dissociação de 1,33x10-4 M para o complexo GAGA-DBD-Fe,determinada por espectroscopia de Mössbauer. Na presença de zinco, a proteína GAGA-DBD tem uma elevada afinidade para o DNA em cadeia dupla, pensando-se que o ião Zn adopta uma função estrutural. No entanto após 5 minutos de exposição à radiação UV a proteína é degradada e deixa de proteger a cadeia de DNA. Por outro lado, na presença de ferro a proteína GAGA-DBD também interactua com o DNA, mas os resultados obtidos parecem indicar a ocorrência de dois processos concorrentes. Por um lado a ligação ao DNA e consequente protecção à radiação ionizante, por outro a degradação do DNA livre via reacções de Fenton, devido à presença de oxigénio molecular.Faculdade de Ciências e TecnologiaPereira, Maria AliceTavares, PedroRUNSilva, Daniela Penas da2011-12-13T14:21:54Z20112011-01-01T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfhttp://hdl.handle.net/10362/6313porinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)instname:Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãoinstacron:RCAAP2024-03-11T03:37:34Zoai:run.unl.pt:10362/6313Portal AgregadorONGhttps://www.rcaap.pt/oai/openaireopendoar:71602024-03-20T03:16:50.545529Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos) - Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãofalse
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