Caracterização da internalização de fármacos antileishmania e novos compostos por macrófagos parasitados por Leishmania spp.

• Autor(a) principal: FERNANDES, Mariana Rafael
• Data de Publicação: 2015
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10362/19136
• topic: Ciências biomédicas; Leishmania spp; Efluxo; Bombas; MDR; Taxa de morbilidade; Taxa de mortalidade; Terapêutica; Tratamento; Domínio/Área Científica::Ciências Médicas

Devido às elevadas taxas de morbilidade e mortalidade, a leishmaniose é uma das doenças parasitárias com maior impacto no Mundo. Um dos problemas associado ao controlo das leishmanioses é a emergente resistência dos parasitas aos fármacos usados clinicamente. A resistência de parasitas do género Leishmania aos fármacos clássicos tem sido associada a bombas de efluxo, em particular aos transportadores ATP-binding cassette (ABC) que conferem o fenótipo de MDR (multidrug resistance). Com a eficácia dos fármacos clássicos comprometida, o desenvolvimento de novos compostos com atividade antileishmania e a terapêutica combinada parecem ser as melhores estratégias para o tratamento da leishmaniose. A presente dissertação teve como objetivo principal caracterizar a internalização de fármacos antileishmania clássicos e de novos compostos por promastigotas e amastigotas axénicos de diferentes espécies de Leishmania e por macrófagos parasitados, identificando vias e mecanismos que privilegiem a destruição do parasita pelos fármacos, minimizando em simultâneo, qualquer ação nefasta na célula hospedeira.O efluxo de diversos inibidores de bombas de efluxo (tioridazina, promezina, prometazina, verapamil, ortovanadato de sódio e Phe-Arg Beta-Naphthylamid) foi analisado em macrófagos e parasitas do género Leishmania por um método fluorimétrico semi-automático que quantifica a acumulação de EtBr em tempo real. Após a análise da toxicidade e eventual atividade antileishmania dos inibidores de bombas de efluxo (EPI) foi caraterizada in vitro a internalização de fármacos clássicos (antimoniato de meglumina e miltefosina) e de novos compostos [ácido ursólico, chalcona (CH8), quercetina e a associação de ácido oleanólico e ácido ursólico] em promastigotas axénicos e macrófagos. Os resultados obtidos permitiram selecionar o verapamil (VER), ortovanadato de sódio (ORT) e Phe-Arg Beta-Naphthylamide (PAßN) como possíveis moduladores de bombas de efluxo de Leishmania. A taxa de infeção de macrófagos após tratamento com miltefosina, ácido ursólico, CH8 e quercetina em monoterapia ou em associação com os EPI selecionados foi também determinada.PAßN modifica a atividade de transportadores que efluxam substratos, nomeadamente transportadores do tipo AcrAB em bactérias, potenciando o efeito da terapêutica na maioria dos parasitas do género Leishmania. Por sua vez, o VER estabelece relações de sinergia com os compostos através da modulação de bombas Pgp. Porém, as funções do ORT podem ser alteradas por outros compostos, como a quercetina, apresentando atividades variáveis. Para além disso, a capacidade dos EPI modularem os transportadores responsáveis pelo efluxo dos fármacos varia com a espécie de Leishmania. A associação de EPI ao tratamento favorece a atividade antileishmania de compostos que são substratos de bombas de efluxo, como é o caso da miltefosina e da CH8. O presente estudo demonstra que os EPI são uma opção válida que deve ser fortemente considerada em terapêutica combinada. A eventual utilização de EPI pode contribuir para potenciar a atividade de fármacos antileishmania, reduzindo a concentração dos compostos e, consequentemente os efeitos tóxicos, prevenindo o aparecimento de resistências.