Desenvolvimento de métodos expeditos para quantificação de cisteína/cistina

• Autor(a) principal: Peixoto, Carla Sofia Andrade
• Data de Publicação: 2013
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10198/9782
• topic: Cisteína; Cistina; Cabelo; Espetrofotometria; HPLC; Validação

No presente trabalho pretendeu-se estudar a aplicação das técnicas de espetrofotometria UV-Vis e da cromatografia líquida em fase reversa acoplado ao detetor de UV para deteção e quantificação de cisteína em amostras de cabelo, cedidas pelo CeNTI, e sujeitas previamente a um processo de hidrólise ácida. Neste trabalho, ambos os métodos desenvolvidos foram validados procedendo ao estudo de parâmetros como a gama de linearidade, limites de deteção e quantificação, precisão e exatidão. No método da espetrofotometria UV-Vis as amostras foram analisadas recorrendo a um espetrofotómetro da PerkinElmer, Lambda 35 de duplo feixe. A resposta foi calculada pela relação entre as absorvâncias dos vários padrões de cisteína e a concentração dos mesmos. Efetuando a análise do coeficiente de correlação para a cisteína foi possível verificar que a correlação entre as absorvâncias e a concentração dos padrões foi linear, verificando-se um R2=0.9995. O limite de deteção e quantificação para a cisteína foi de 0,002 mM e 0,005 mM, respetivamente. No método de HPLC todos os padrões (cisteína e cistina) e amostras de cabelo foram analisadas utilizando uma coluna C18, 5 μm, (15 cm e diâmetro de 4,6 mm), e uma fase móvel composta por ácido tricloroacético (TCA) 0,01M e pH=2,2 com acetonitrilo na proporção de 9,6:0,4. A resposta foi calculada pela relação entre área dos picos de cisteína e cistina vs concentração de cisteína e cistina. Pela análise dos coeficientes de correlação quadrática da curva de calibração para os padrões de cisteína e cistina constatou- se que existe uma boa correlação entre a área e a concentração dos padrões, tendose verificado um R2=0.9981 para a cisteína e R2=0.9978 para a cistina. O limite de deteção registado para a cisteína apresentou o valor de 0,040mM, enquanto para a cistina o valor foi de 0,021 mM. O limite de quantificação verificado par a cisteína foi de 0,120 mM e para a cistina foi de 0,064 mM. Os resultados de validação aplicados para a linearidade, limites de deteção e quantificação e exatidão das amostras analisadas demonstraram a aplicabilidade de ambos os viii métodos na deteção e quantificação de cisteína e cistina nas amostras de cabelo. No entanto efetuando a comparação dos dois métodos, verifica-se que o método da espetrofotometria foi aquele que permitiu detetar um maior número de resíduos de cisteína presente nas amostras de cabelo.