Determinação de opiáceos em sangue total com recurso a sistemas de microextração e cromatografia gasosa acoplada à espetrometria de massa triplo quadrupolo
Autor(a) principal: | |
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Data de Publicação: | 2018 |
Tipo de documento: | Dissertação |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos) |
Texto Completo: | http://hdl.handle.net/10400.6/8602 |
Resumo: | O presente relatório de estágio encontra-se dividido em três capítulos que descrevem a experiência profissionalizante nas áreas de Investigação, Farmácia comunitária e Farmácia Hospitalar, respetivamente. O Capítulo 1 aborda o desenvolvimento de um método para determinação de morfina (MOR), codeína (COD) e 6-monoacetilmorfina (6-MAM) em sangue total, utilizando a microextração em seringa empacotada (MEPS) e cromatografia gasosa acoplada à espetrometria de massa triplo quadrupolo (GC-MS/MS). Este trabalho foi desenvolvido no Centro de Investigação em Ciências da Saúde da Universidade da Beira Interior. O procedimento de extração da amostra foi previamente otimizado recorrendo ao planeamento fatorial fracionado (2k-1), ferramenta estatística aplicada ao processo decisório que avalia de forma multivariada os fatores envolvidos na extração (derrames, quantidade de soluções de lavagem e eluição, número de lavagens do adsorvente e número de ciclos de eluição). As condições finais otimizadas foram: número de aspirações (20), quantidade de ácido fórmico utilizado na solução de lavagem (3,36%), número de lavagens do adsorvente (1), quantidade de hidróxido de amónio utilizado na solução de eluição (2,36%) e número de ciclos de eluição (11). Utilizando um volume de amostra de 250µL, o método foi validado segundo as normas internacionalmente aceites, da Food and Drug Administration (FDA) e do Scientific Working Group of Forensic Toxicology (SGWTOX), para a validação de métodos bioanalíticos. Os parâmetros estudados incluíram a seletividade, modelo de calibração e linearidade, limite de deteção (LOD), limite de quantificação (LLOQ), precisão, exatidão, integridade de diluição e recuperação. O método mostrou-se linear no intervalo de concentrações de 5 a 1000ng/mL, com coeficientes de determinação (R2) superiores a 0,99 para todos os analitos de interesse. As precisões e exatidões intra e interdia situaram-se em conformidade com os critérios supramencionados, ou seja, apresentando coeficientes de variação (CV) inferiores a 15% e BIAS dentro do intervalo ±15% da concentração teórica. Em relação às recuperações absolutas obtidas, os valores variam entre 6% e 23%. O método validado mostrou ser aplicável à análise de amostras reais, sendo uma ferramenta vantajosa para a triagem destes compostos na área da toxicologia. Salienta-se que este é o primeiro estudo que combina a GC-MS/MS com a MEPS para a determinação destes compostos em amostras de sangue. O Capítulo 2 é dedicado ao estágio na vertente de Farmácia Comunitária realizado na Farmácia Costa. Por fim, o Capítulo 3 descreve o estágio na vertente de Farmácia Hospitalar realizado no Hospital de Sousa Martins. Em ambos os capítulos, são abordadas as atividades desempenhadas durante o período de estágio, os conhecimentos adquiridos, bem como o enquadramento legislativo destas duas áreas da profissão farmacêutica. |
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Determinação de opiáceos em sangue total com recurso a sistemas de microextração e cromatografia gasosa acoplada à espetrometria de massa triplo quadrupoloExperiência profissionalizante na vertente de Farmácia Comunitária, Farmácia Hospitalar e InvestigaçãoFarmácia ComunitáriaFarmácia Hospitalar.Gc-Ms/MsMepsOpiáceosSangueDomínio/Área Científica::Ciências Médicas::Ciências da Saúde::Ciências FarmacêuticasO presente relatório de estágio encontra-se dividido em três capítulos que descrevem a experiência profissionalizante nas áreas de Investigação, Farmácia comunitária e Farmácia Hospitalar, respetivamente. O Capítulo 1 aborda o desenvolvimento de um método para determinação de morfina (MOR), codeína (COD) e 6-monoacetilmorfina (6-MAM) em sangue total, utilizando a microextração em seringa empacotada (MEPS) e cromatografia gasosa acoplada à espetrometria de massa triplo quadrupolo (GC-MS/MS). Este trabalho foi desenvolvido no Centro de Investigação em Ciências da Saúde da Universidade da Beira Interior. O procedimento de extração da amostra foi previamente otimizado recorrendo ao planeamento fatorial fracionado (2k-1), ferramenta estatística aplicada ao processo decisório que avalia de forma multivariada os fatores envolvidos na extração (derrames, quantidade de soluções de lavagem e eluição, número de lavagens do adsorvente e número de ciclos de eluição). As condições finais otimizadas foram: número de aspirações (20), quantidade de ácido fórmico utilizado na solução de lavagem (3,36%), número de lavagens do adsorvente (1), quantidade de hidróxido de amónio utilizado na solução de eluição (2,36%) e número de ciclos de eluição (11). Utilizando um volume de amostra de 250µL, o método foi validado segundo as normas internacionalmente aceites, da Food and Drug Administration (FDA) e do Scientific Working Group of Forensic Toxicology (SGWTOX), para a validação de métodos bioanalíticos. Os parâmetros estudados incluíram a seletividade, modelo de calibração e linearidade, limite de deteção (LOD), limite de quantificação (LLOQ), precisão, exatidão, integridade de diluição e recuperação. O método mostrou-se linear no intervalo de concentrações de 5 a 1000ng/mL, com coeficientes de determinação (R2) superiores a 0,99 para todos os analitos de interesse. As precisões e exatidões intra e interdia situaram-se em conformidade com os critérios supramencionados, ou seja, apresentando coeficientes de variação (CV) inferiores a 15% e BIAS dentro do intervalo ±15% da concentração teórica. Em relação às recuperações absolutas obtidas, os valores variam entre 6% e 23%. O método validado mostrou ser aplicável à análise de amostras reais, sendo uma ferramenta vantajosa para a triagem destes compostos na área da toxicologia. Salienta-se que este é o primeiro estudo que combina a GC-MS/MS com a MEPS para a determinação destes compostos em amostras de sangue. O Capítulo 2 é dedicado ao estágio na vertente de Farmácia Comunitária realizado na Farmácia Costa. Por fim, o Capítulo 3 descreve o estágio na vertente de Farmácia Hospitalar realizado no Hospital de Sousa Martins. Em ambos os capítulos, são abordadas as atividades desempenhadas durante o período de estágio, os conhecimentos adquiridos, bem como o enquadramento legislativo destas duas áreas da profissão farmacêutica.This report is divided into three chapters that describe the professional experience in the areas of Research, Community Pharmacy, and Hospital Pharmacy, respectively. The chapter 1 describes the development of a method for the determination of MOR (morphine), codeine (COD) and 6-monoacetylmorphine (6-MAM) in whole blood using microextraction by packed sorbent (MEPS) and gas chromatography tandem mass spectrometry (GC-MS/MS). This work was developed at the Health Sciences Research Center from the University of Beira Interior. We proceeded to the optimization of the extraction technique using the fractional factorial planning (2k-1), a statistical tool applied to the decision process that assesses in a multivariate way the factors involved in the extraction (strokes, amount of washing and elution solutions, number of washes of the sorbent and number of elution cycles. The final optimized conditions were: number of strokes (20), amount of formic acid in the washing solution (3.36%), number of washes of the sorbent (1), amount of ammonium hydroxide in the elution solution (2.36%) and number of elution cycles (11). Using a sample volume of 250 µL, the method was validated according to internationally accepted standards, the Food and Drug Administration (FDA) and the Scientific Working Group of Forensic Toxicology (SGWTOX) for the validation of bioanalytical methods. The studied parameters included selectivity, calibration model and linearity, limit of detection (LOD) and limit of quantification (LLOQ), precision, accuracy, stability, dilution integrity and recovery. The method proved to be linear in the range of 5-1000 ng/mL with coefficients of determination (R2) greater than 0.99 for all analytes. Intra-and interday accuracy and precision were in accordance with the above-mentioned criteria, presenting coefficients of variation (CV) of less than 15% and RE within a range of ± 15% of the theoretical concentration. Regarding the obtained absolute recoveries, the values ranged between 6% and 23%. The validated method was shown to be applicable to the analysis of real samples being an advantageous tool for the screening of heroin, morphine and codeine. This is the first time that GC–MS/MS with MEPS was used for the determination of these compounds in biological fluids. The chapter 2 is dedicated to the internship in the field of Community Pharmacy held at Farmácia Costa. Finally, Chapter 3 describes the stage in Hospital Pharmacy, carried out at Hospital de Sousa Martins. Both chapters deal with the activities performed during the probationary period, the knowledge acquired, as well as the legislative framework of these two areas of the pharmaceutical profession.Alba, Maria Eugénia GallardoRosado, Tiago Alexandre PiresuBibliorumPrata, Margarida de Jesus2020-01-22T16:54:12Z2018-10-242018-10-82018-10-24T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfhttp://hdl.handle.net/10400.6/8602TID:202361306porinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)instname:Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãoinstacron:RCAAP2023-12-15T09:48:43Zoai:ubibliorum.ubi.pt:10400.6/8602Portal AgregadorONGhttps://www.rcaap.pt/oai/openaireopendoar:71602024-03-20T00:48:54.590234Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos) - Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãofalse |
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