In vivo glia-to-neuron reprogramming

• Autor(a) principal: Fernandes, Catarina de Sá
• Data de Publicação: 2021
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: eng
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10362/117664
• topic: Reprogramação de Células Neuronais; Neurónios; Ascl1SA6; Neuronal Reprogramming; Neurons; Ascl1SA6; Ciências Médicas

RESUMO: A reprogramação direta de células somáticas em neurónios é uma estratégia promissora para a reparação de danos cerebrais. Esta técnica já foi concretizada in vivo, em glia adulta reativa e pós-natal do córtex, através da expressão forçada de fatores de reprogramação introduzidos por vetores virais. No entanto, ainda existem limitações a ultrapassar para que esta técnica possa ser utilizada como uma terapia eficaz e segura. Este projeto pretende investigar o efeito da injeção de vírus no córtex pós-natal e adulto lesionado, pois estudos recentes sugerem que os vetores virais incitam respostas inflamatórias, que podem influenciar o resultado da reprogramação celular. Como tal, examinámos a ativação da glia e a resposta imune desencadeada pelos vetores virais mais utilizados em reprogramação neuronal (retrovírus, lentivírus e vírus adeno-associado) no córtex pós-natal e o efeito do retrovírus no córtex lesionado adulto. O nosso grupo investigou o potencial de reprogramação do fator neurogénico Ascl1 e descobriu que o seu mutante Ascl1SA6, quando combinado com a molécula Bcl2, aumenta a eficácia da reprogramação neuronal direta e facilita a especificação dos neurónios induzidos. Assim, de seguida foi avaliada a eficácia da reprogramação, maturação e sobrevivência dos neurónios induzidos com Ascl1SA6 ou Ascl1. Para isso, a coexpressão foi otimizada no córtex pós-natal. De seguida, a capacidade do mutante Ascl1SA6 converter glia in vivo foi avaliada no córtex lesionado adulto. Por fim, examinámos a sobrevivência a longo prazo dos neurónios induzidos com a expressão de Ascl1SA6 e Bcl2. Neste trabalho expomos que os vetores virais mais utilizados em reprogramação celular provocam a ativação da glia e incitam uma resposta imune no córtex pós-natal, sobretudo o lentivírus. No córtex adulto, a injeção com o retrovírus agrava a resposta inflamatória que acompanha a lesão. Relativamente ao segundo objetivo, observámos que a coexpressão de Ascl1SA6 e Bcl2 com um único vetor diminuiu a eficácia da reprogramação comparado com o uso de vários vetores. De seguida, que o mutante Ascl1SA6 induz a conversão neuronal, mas com pouca eficiência e finalmente, que a sobrevivência dos neurónios induzidos por Ascl1SA6 e Bcl2 a longo prazo é limitada. Em conclusão, este estudo sugeriu o impacto dos vetores virais na conversão neuronal e forneceu mais informação sobre o potencial de reprogramação do mutante Ascl1SA6 e as limitações na sobrevivência a longo prazo dos neurónios induzidos.