Desenvolvimento de um método de análise quantitativa de concentração celular e PHB por microscopia de fluorescência e análise de imagem

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Alves, Marco António Ricardo
Data de Publicação: 2009
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
Texto Completo: http://hdl.handle.net/10362/2392
Resumo: Dissertação apresentada na Faculdade de Ciências e Tecnologia da Universidade Nova de Lisboa para obtenção do grau de Mestre em Engenharia Química e Bioquímica
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spelling Desenvolvimento de um método de análise quantitativa de concentração celular e PHB por microscopia de fluorescência e análise de imagemDissertação apresentada na Faculdade de Ciências e Tecnologia da Universidade Nova de Lisboa para obtenção do grau de Mestre em Engenharia Química e BioquímicaO objectivo principal deste trabalho é o desenvolvimento de uma técnica de análise de imagem que permita a determinação da concentração celular e da concentração de PHB em amostras retiradas de fermentações experimentais para produção de PHB com culturas puras de E.coli recombinante. Foram estudados vários métodos de conservação das células e, também, a sua influência na qualidade das imagens obtidas. O método de conservação que apresentou melhores resultados foi a fixação das amostras com 5% final de formaldeído. Determinou-se ainda que uma concentração de DAPI de 10 μg/ml era adequada para obter imagens com boa qualidade e desenvolveu-se com sucesso um método de double-staining com DAPI e Azul de Nilo para determinar a concentração de biopolímero através de análise de imagem sem ser necessário recorrer a pares de amostras. Foi desenvolvido um método de análise de imagem baseado na aplicação CellC, escrita em linguagem MatLab, para determinar a concentração celular e a concentração volumétrica de biopolímero através de análise de imagem, sendo monitorizadas cinco fermentações para desenvolver e testar o método. Determinou-se ainda que não existe uma relação linear entre o número de diluições prévias a fazer às amostras, de forma a obter um número razoável de células por campo, e os valores de densidade óptica a 600nm e de peso seco, sendo que, no entanto, para determinadas gamas destes valores se observou uma relação logarítmica. A relação observada foi utilizada em experiências posteriores e permitiu uma diluição adequada das amostras. Verificou-se que para a determinação da concentração celular através de análise de imagem, a evolução da concentração celular ao longo do tempo foi semelhante aos resultados obtidos através de medidas de densidade óptica a 600nm e pesos secos. Os resultados obtidos para a concentração de PHB após análise de imagem comportaram-se de forma semelhante aos obtidos através de cromatografia gasosa, demonstrando que o método desenvolvido pode ser utilizado para quantificação volumétrica do biopolímero. Em suma, neste trabalho desenvolveu-se com sucesso uma técnica de análise de imagem que permite determinar as concentrações celular e volumétrica de biopolímero, tendo em vista os propósitos inicialmente estabelecidos.FCT - UNLEusébio, MárioRUNAlves, Marco António Ricardo2010-01-13T13:37:00Z20092009-01-01T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfhttp://hdl.handle.net/10362/2392porinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)instname:Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãoinstacron:RCAAP2024-03-11T03:32:34Zoai:run.unl.pt:10362/2392Portal AgregadorONGhttps://www.rcaap.pt/oai/openaireopendoar:71602024-03-20T03:15:07.522677Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos) - Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãofalse
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