Exosomes as tools for biomarker discovery

• Autor(a) principal: Martins, Tânia Cristina Soares
• Data de Publicação: 2017
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: eng
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10773/21996
• topic: Biomedicina molecular; Genética - Metabolismo; Doença de Alzheimer; Marcadores bioquímicos

Os exossomas são pequenas vesículas extracelulares envolvidas em vários processos fisiológicos e patológicos. O potencial dos exosomas como fontes de biomarcadores para o diagnóstico, prognóstico e mesmo para a terapêutica tem intensificado a investigação nesta área, apoiando o potencial dos exosomas na descoberta de biomarcadores. A centrifugação diferencial é o método mais usado, mas é demorado, requer grandes volumes de amostra e as altas velocidades de centrifugação podem comprometer a integridade dos exossomas. Apesar das várias opções disponíveis, nenhum consenso foi atingido quanto à melhor metodologia para isolar exossomas. Neste estudo, dois métodos baseados em precipitação e um método baseado em colunas foram comparados para a isolação de exosomas a partir de soro, plasma e líquido cefalorraquidiano humano (LCR). Foi realizada uma completa caracterização dos exosomas isolados, incluindo a análise do tamanho e estabilidade das partículas, análise da morfologia por microscopia eletrónica de transmissão, incluindo métodos de quantificação de partículas e proteína. Todos os métodos isolaram exosomas a partir dos três biofluidos, contudo apresentaram performances diferentes em termos de rendimento exossomal. Estes dados apoiam a hipótese de que para além da ultracentrifugação outros métodos podem ser aplicados para isolar exosomas no contexto da investigação clínica e translacional. Neste estudo foi também explorado o potencial dos exosomas derivados do soro humano como transportadores de biomarcadores candidatos para a Doença de Alzheimer (DA). Estes podem representar métodos menos invasivos do que o atual diagnóstico neuroquímico para a DA, baseado no LCR. Neste caso, foi monitorizado o potencial de sAPPα e sAPPβ nos exosomas extraídos de soro de indivíduos com demência moderada, severa e casos de DA diagnosticados. Foi observada uma diminuição nas médias de sAPPα e sAPPβ dos exosomas neuronais derivados do soro, suportando o potencial dos exosomas na descoberta de biomarcadores para a DA.