Caracterização de recetores do linfoma canino para imunoterapia

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Almeida, André Gil Pedro Pinto de
Data de Publicação: 2018
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
Texto Completo: http://hdl.handle.net/10400.5/15822
Resumo: Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina Veterinária
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spelling Caracterização de recetores do linfoma canino para imunoterapiaLinfoma caninoimunoterapiaexpressão de recetores de membranaCanine lymphomaimmunotherapyreceptors’ expressionDissertação de Mestrado Integrado em Medicina VeterináriaO linfoma canino é a terceira neoplasia mais prevalente no cão, sendo a neoplasia hematopoiética mais frequente nesta espécie. Apesar da otimização dos protocolos de quimioterapia, 50% dos animais não passa do primeiro ano de sobrevida e 90% não chega aos dois anos. O objetivo deste estudo foi caracterizar a expressão de recetores de membrana no linfoma canino com o intuito de contribuir para o desenvolvimento de imunoterapias, e os recetores estudados foram o CD19, o CD20, o CD21, o CD22, o CD74 e o CD80. Para este fim recorreuse a uma linha celular de linfoma canino de células B (CLBL-1), e a amostras de linfonodos de 22 animais diagnosticados com linfoma no Hospital Escolar da Faculdade de Medicina Veterinária da Universidade de Lisboa e de 8 animais saudáveis de um grupo controlo. A partir dessas amostras fez-se quantificação relativa da expressão génica dos recetores por qRTPCR, avaliou-se a expressão proteica de CD20 por Western Blot (WB) e sequenciou-se o CD20 pelo método de Sanger. Os resultados obtidos pela técnica de qRT-PCR permitiram observar, em linfoma B, uma sobrexpressão génica significativa do CD19 e CD20, de 10,9 e 8,2 folds, respetivamente, e uma subexpressão génica significativa do CD21, do CD74 e do CD80, de respetivamente 0,05, 0,5 e 0,8 folds. Por sua vez, a quantificação de proteína do CD20 por WB corroborou a sua sobrexpressão em linfoma B, tendo uma correlação de 0,53 com a expressão de mRNA. A sequenciação do CD20 demonstrou que o seu gene é conservado. Observou-se, por fim, que as expressões génicas de CD19, CD20, CD21 e CD22 apresentam uma forte correlação entre si no grupo controlo, sendo esta mais fraca nos animais com linfoma B. Conclui-se que com esta dissertação foi possível caracterizar a expressão de vários recetores e contribuir para o desenvolvimento de novas terapias para o linfoma canino ao validar-se o CD20 e apontando-se o CD19, o CD22 e o CD74 como potenciais alvos de imunoterapia.ABSTRACT - Characterization of Canine Lymphoma Receptors for Immunotherapy - Canine lymphoma is the third most prevalent neoplasia in dogs and is the most common hematopoietic malignancy in this species. Despite the chemotherapy protocols optimization, 50% of the dogs don’t survive the first year with the disease and only 10% survive 2 years. The aim of this study was to characterize the expression of membrane receptors like CD19, CD20, CD21, CD22, CD74 and CD80, and by doing so, contribute to the development of immunotherapy for canine lymphoma. To this end, a B-cell canine lymphoma cell line (CLBL-1) was used, along with lymph node samples from 22 dogs diagnosed with canine lymphoma and a control group of 8 healthy dogs. From those samples, a relative quantification of the receptors’ mRNA expression was performed by qPCR, the CD20 protein quantification was performed using Western Blot (WB), and Sanger sequencing was used to assess the CD20 exons’ sequence. The results provided by qPCR showed a significant CD19 and CD20 gene upregulation, of 10.9 and 8.2 folds respectively, and a significant downregulation of the CD21, CD74 and CD80 genes, of 0.05, 0.5 and 0.8 respectively, in canine B-cell lymphoma. The protein WB results were also consistent with a strong CD20 expression in canine B-cell lymphoma, correlating with the mRNA expression (Rho=-0.53). All the dogs evaluated in this study had a similar CD20 gene sequence, which indicates that CD20 is a conserved gene. Finally, a strong correlation was seen between the CD19, CD20, CD21 and CD22 gene expression in the control group, but these correlations were found to be much weaker in the B-cell lymphoma group. In conclusion, this study succeeded in the characterization of several canine lymphoma receptors and may contribute to the development of new therapies by validating the targeting of CD20 and by indicating potential immunotherapy targets like CD19, CD22 and CD74.CIISA - Centro de Investigação Interdisciplinar em Sanidade AnimalUniversidade de Lisboa, Faculdade de Medicina VeterináriaSilva, Frederico Nuno Castanheira Aires daGil, Solange Judite Roque Coelho AlvesRepositório da Universidade de LisboaAlmeida, André Gil Pedro Pinto de2019-08-13T00:30:13Z2018-06-152018-06-15T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfhttp://hdl.handle.net/10400.5/15822TID:202025136porAlmeida, A.G.P.P. (2018). Caracterização de recetores do linfoma canino para imunoterapia. Dissertação de mestrado. Universidade de Lisboa, Faculdade de Medicina Veterinária, Lisboa.info:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)instname:Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãoinstacron:RCAAP2023-03-06T14:45:43Zoai:www.repository.utl.pt:10400.5/15822Portal AgregadorONGhttps://www.rcaap.pt/oai/openaireopendoar:71602024-03-19T17:01:23.141929Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos) - Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãofalse
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