Desenvolvimento e validação de um método de doseamento da neomicina por HPLC com deteção UV/Vis

• Autor(a) principal: Machado, Rita Cerdeira Vieira
• Data de Publicação: 2023
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10362/162094
• topic: HPLC; Neomicina; Derivatização; FMOC-CL; DNFB; Doseamento; Domínio/Área Científica::Engenharia e Tecnologia::Engenharia Química

Este trabalho teve como principal objetivo o desenvolvimento e validação de um método de doseamento da neomicina por HPLC com deteção UV/Vis, cuja finalidade será a sua implementação no doseamento do composto numa formulação farmacêutica (creme). Uma vez que a neomicina não possui grupos cromóforos, a sua deteção com recurso a detetores UV/Vis apenas é possível recorrendo a derivatizações. Como tal, neste trabalho começou por se desenvolver um método de derivatização com o reagente 9-Fluorenylmethyl Chloroformate (FMOC-CL). Contudo, durante o desenvolvimento, verificou-se que este método possuía bastantes constrangimentos e pontos críticos, havendo uma variabilidade indesejada nos resultados, o que fez com que testes preliminares de exatidão apresentassem recuperações fora da gama dos 98% a 102% (para ensaios com preparações independentes obteve-se um valor mínimo de recuperação de 96,07% e um valor máximo de recuperação de 103,17%, as %RSD nestes ensaios foram 1,48%, 2,17%, 1,35%, resultantes de diferenças entre respostas superiores a 2%) e estando a si associada uma densa complexidade analítica (que se deve, por exemplo, à dificuldade em manter as condições necessárias à preservação da solução de derivatização e ao facto do procedimento analítico ser composto por várias etapas). Assim, redirecionou-se o desenvolvimento analítico para um outro método com um novo reagente de derivatização, o 1-Fluoro-2,4,-Dinitrobenzene (DNFB). O método com o reagente de derivatização DNFB, foi testado e otimizado, nomeadamente na composição da fase móvel, no volume de injeção e no comprimento de onda de deteção. Este método, mais promissor, mostrou elevada probabilidade de satisfazer os critérios de aceitação de uma validação, nos parâmetros de exatidão (valores de recuperação obtidos entre 98% a 102% (recuperação mínima: 99,60% e recuperação máxima: 101,43%)) e linearidade (r: 0,9969, resíduos em cada ponto < 2% e resíduo na origem de 1,15% < 2%). Para a preparação das soluções amostra percebeu-se que a água seria o solvente mais adequado para a extração e solubilização da substância ativa (API), permitindo um aspeto cromatográfico semelhante ao obtido para a solução padrão. Ao fazer uma avaliação de possíveis interferências no pico da neomicina B, foi possível observar que nem o solvente, nem a solução de derivatização, nem a matriz do creme nem mesmo as principais impurezas da matéria prima, a neomicina C e a neamina, apresentavam picos que pudessem interferir com o pico da neomicina B. Ao utilizar dois lotes distintos de produto acabado (PA), foi ainda possível observar que o método apresenta também elevada probabilidade de satisfazer os critérios de repetibilidade, dado que para cada lote se obtiveram valores de %RSD inferiores a 2% (%RSD para o lote fora de prazo de 0,5% e %RSD para o lote acabado de produzir de 0,87%).