Identification and characterization of new listeria monocytogenes virulence factors

• Autor(a) principal: Gonçalves, Ana Cláudia Moutinho
• Data de Publicação: 2019
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: eng
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10400.14/30601
• topic: Listeria monocytogenes; Patogénico gram-positivo; Fatores de virulência; Infeção; Gram-positive pathogen; Virulence factors; Infection; Domínio/Área Científica::Ciências Naturais::Ciências Biológicas

As doenças infeciosas são uma das principais causas de morte mundialmente, sendo a principal em bebés e crianças. Embora os tratamentos convencionais para combater infeções microbianas sejam muito eficazes, geram subpopulações bacterianas resistentes. O controlo da virulência bacteriana e a modulação da resposta do hospedeiro surgem como alternativas terapêuticas promissoras para combater as infeções. Listeria monocytogenes é uma ameaça recorrente para a saúde pública e para a indústria alimentar. É um patogénio Gram-positivo e intracelular de origem alimentar e um excelente modelo para o estudo da interação do hospedeiro com o patogénio. Esta bactéria tem a capacidade de atravessar as barreiras intestinal, hematoencefálica e materno-fetal e colonizar tecidos do hospedeiro podendo causar listeriose. Esta capacidade é alcançada através da expressão de inúmeros fatores de virulência que permite L. monocytogenes invadir, sobreviver e multiplicar dentro de células fagocíticas e não-fagocíticas. A análise do modo como este patogénio manipula as funções celulares do hospedeiro, leva à identificação de novos mecanismos que podem ser alargados a outros patogénios relevantes e ajuda na criação de novas estratégias terapêuticas. Deste modo, este trabalho teve como objetivo identificar e caracterizar novos mecanismos de virulência de L. monocytogenes. A primeira análise transcriptómica in vivo de L. monocytogenes revelou que vários genes são mais expressos no baço de morganhos infetados e que a maioria desses fatores de virulência são proteínas de superfície e proteínas secretadas. Neste trabalho, selecionámos três genes mais expressos in vivo, lmo2114, lmo2115 e lmo2522 com uma possível função na virulência de L. monocytogenes. Mutantes de deleção foram gerados para caracterizar o papel dos genes deletados no processo infecioso, analisando diferentes etapas do ciclo de infeção celular in vitro e virulência in vivo. Nós mostrámos que o transportador ABC, codificado pelos genes lmo2114 e lmo2115, é necessário para a entrada da bactéria em células eucarióticas e para a virulência in vivo. Além disso, observámos que uma proteína possivelmente de ligação à parede celular e codificada por lmo2522 é necessária para a capacidade de L. monocytogenes aderir e invadir células Caco-2 e importante para virulência in vivo. De modo geral, este trabalho permitiu a identificação de novos genes de virulência de L. monocytogenes importantes para a infeção e, assim, e gerou possíveis e novos alvos para o desenvolvimento de estratégias de anti-virulência.