Nova abordagem técnica no estudo citogenético da leucemia linfocítica crónica-B

• Autor(a) principal: Valença, Catarina de Jesus Mesquita
• Data de Publicação: 2018
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10348/9117
• topic: LLC-B; TPA; DSP30; IL-2; alterações cromossómicas

A leucemia linfocítica crónica B (LLC-B) é a forma de leucemia mais prevalente no hemisfério Ocidental, afetando sobretudo indivíduos adultos, com idade superior a 65 anos. É uma doença clonal linfoproliferativa, caracterizada pela proliferação anormal e acumulação de linfócitos B neoplásicos nos tecidos sanguíneos, órgãos linfáticos e medula óssea. A análise citogenética desempenha um papel muito importante no estudo desta patologia, uma vez que a deteção de alterações cromossómicas específicas tem implicações prognósticas e terapêuticas. Para a análise citogenética destas amostras é necessário a realização de culturas com estimuladores de linfócitos B. O estimulador normalmente utilizado para a obtenção de metafases é o 1,2-Otetradecanoilforbol-13-acetato (TPA), que deteta alterações cromossómicas em 40 a 50% dos casos por citogenética convencional. Recentemente, novos estimuladores, como o oligodesoxinucleótido GpG-DSP30 (DSP30) e a Interleucina (IL-2) foram aplicados às culturas celulares com o objetivo de melhorar o número de metafases e a taxa de deteção de anomalias cromossómicas. O desenvolvimento de novas técnicas de citogenética molecular, nomeadamente a técnica hibridação in situ por fluorescência (FISH), vieram prestar um grande contributo para o estudo da LLC-B, permitindo a deteção de anomalias em 80% dos casos. O objetivo desta dissertação consiste na implementação do protocolo mais eficaz na estimulação das células com LLC-B. Para atingir os objetivos, foram testados vários protocolos, onde se aplicaram dois estimulares (DSP30 e IL-2), com diferentes concentrações, isoladamente e em combinação. Foi ainda aplicado, em simultâneo, o estimulador convencional (TPA). A combinação dos três estimuladores (TPA/DSP30/IL-2), foi também testada. Para cada protocolo foi realizada a citogenética convencional e a FISH. As culturas estimuladas com os dois ou os três estimuladores em simultâneo (DSP30/IL-2 (2 µM; 0,2 µg/mL) ou com TPA/DSP30/IL-2 (20 ng/mL; 2 µM; 0,2 µg/mL)) permitiram a obtenção de um maior número de metafases e de metafases com melhor qualidade (cromossomas mais alongados e com melhor resolução de bandas), quando comparados com as culturas estimuladas só com TPA (20 ng/mL). Verificou-se ainda que a aplicação destes estimuladores aumentou a taxa de deteção de alterações cromossómicas, nomeadamente, de novos rearranjos e de cariótipos complexos. A técnica FISH, foi útil na deteção de deleções submicroscópicas, não detetadas pela citogenética convencional. Em suma, o protocolo para o estudo de doentes com LLC-B deve incluir uma das seguintes combinações mitogénicas: DSP30/IL-2 (2 µM; 0,2 µg/mL) ou TPA/DSP30/IL-2 (20 ng/mL; 2 µM; 0,2 µg/mL). O estudo citogenético desta patologia deve abranger a citogenética convencional e a FISH, uma vez que estas técnicas desempenham um papel complementar no diagnóstico e prognóstico de doentes com LLC-B.