Modulação da sensibilidade a drogas quimioterapêuticas através de mecanismos epigenéticos

• Autor(a) principal: Fernandes, Lurdes Sofia Oliveira
• Data de Publicação: 2015
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10773/21531
• topic: Cancro da laringe - Alterações genéticas; Epigenética; Biomedicina molecular

O cancro colo-rectal (CRC) é um problema de saúde na sociedade Ocidental, sendo o terceiro tipo de cancro mais comum. O estudo de padrões genéticos não é o suficiente para definir a suscetibilidade humana para uma patologia em particular. O CRC pode resultar da acumulação de alterações genéticas e epigenéticas. A epigenética é definida como um estudo de mudanças hereditárias na expressão dos genes, sem alterações na sequência de nucleótidos, sendo que o mecanismo epigenético mais explorado é a metilação de ADN em regiões promotoras. O fenótipo metilador das ilhas CpG (CIMP) caracteriza o CRC e, neste caso, ocorre o silenciamento de genes supressores tumorais por hipermetilação. A metilação anormal do promotor de MLH1 ocorre em aproximadamente 80% dos casos de CRC esporádico. Ao contrário das mutações genéticas, o silenciamento epigenético pode ser reativado por moléculas que atuam como modificadores epigenéticos (por exemplo, 5-azacitidina - 5-Aza) através da inibição de ADN metiltransferase. Neste estudo explorou-se uma nova aplicação do ensaio cometa - o CoMeth (desenvolvido pelo nosso grupo) - com o objetivo de avaliar os efeitos epigenéticos na expressão de MLH1. Para isso, foi utilizada uma linha celular com deficiências no sistema MMR, cujo MLH1 está epigeneticamente silenciado pela hipermetilação do promotor e por conseguinte, não apresentará cometas em resposta ao MNU devido à falta de MMR funcional. Inicialmente confirmou-se que 5-Aza potencial efeitos citotóxicos induzidos pelo agente alquilante, MNU, visto apresentar um aumento percentual de ADN na cauda dos cometas, em células tratadas com 5-Aza + BG + MNU comparativamente ao tratamento com BG + MNU. Isto demonstrou que o composto 5-AZA foi capaz de reverter a hipermetilação de hMLH1, tornando o sistema MMR funcional, aumentando os níveis de lesões O6MeG convertidas em SBs, detetadas pelo ensaio CoMeth. Foi demonstrado também que o 5-Aza inibe a expressão do gene DNMT1 levando ao restabelecimento de hMLH1, como verificado por qRT-PCR. Além disso, usando o ensaio CoMeth, foi possível observar que o tratamento com 5-Fluorouacil (5-FU) + 5-Aza, em termos clínicos poderá constituir uma nova estratégia terapêutica para reduzir a resistência tumoral ao agente quimioterapêutico 5-FU, visto que a reativação de hMLH1 faz com que as células cancerígenas fiquem mais sensíveis a este fármaco quimioterapêutico. Neste ensaio também foram testados alguns compostos naturais, verificando-se que (-)-epigallocatechin-3-gallate (EGCG) e Salvia officianalis (SO) induziram danos similares aos níveis do 5-Aza, sugerindo que esses compostos apresentam efeitos epigenéticos potenciais. Finalmente, verificou-se que o 5-Aza e SO não apresentam efeitos moduladores no sistema BER, dado que quando as células foram incubadas com 5-Aza/SO + BG + Mx + MNU, não se observou um aumento de danos no ADN. Como conclusão, no presente trabalho foi descrita uma nova aplicação do CoMeth, nomeadamente como ensaio que pode ser utilizado para testar potenciais compostos epigenéticos, sintéticos ou naturais, que revertam a hipermetilação de genes de reparação de ADN e consequentemente, contribuir para a melhoria da eficácia de fármacos quimioterapêuticos.