Espetrometria de massa aplicada à microbiologia clínica moderna: pesquisa e identificação de biomarcadores em espécies bacterianas multirresistentes

• Autor(a) principal: Sousa, Telma Susana Lopes de
• Data de Publicação: 2019
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10348/9643
• topic: MALDI-TOF MS; Enterococcus spp.

O uso excessivo de antibióticos na produção animal e no meio hospitalar tem vindo a condicionar uma pressão de seleção significativa nas estirpes bacterianas, resultando no aparecimento de estirpes cada vez mais resistentes a estes antibióticos. Estas resistências são progressivamente um obstáculo para a saúde humana. Um dos mecanismos mais importantes desta resistência é a atividade das β-lactamases de amplo espetro (ESBL) que confere resistência a vários antibióticos designadamente as cefalosporinas de terceira e quarta geração. Outro exemplo significativo desta problemática é a existência de estirpes de Enterococos Resistentes à Vancomicina (VRE), que pode indicar a inexistência de barreiras entre hospitais, população e animais. Neste contexto, os objetivos deste trabalho consistiram em caracterizar fenotipicamente e genotipicamente os isolados de Escherichia coli e Enterococcus spp. e detetar putativos biomarcadores de resistência aos antibióticos através da técnica MALDI-TOF MS. A grande maioria das amostras de E. coli e todas as amostras de Enterococcus spp. possuíam multirresistência. A maioria dos isolados de E. coli na caracterização fenotípica evidenciavam resistência ao trimethoprim-sulfamethoxazole (80%), tetraciclina (63%) e ampicilina (57%), enquanto os isolados de Enterococcus spp. demonstraram resistência elevada à vancomicina (100%), teicoplanina (95%) e tetraciclina (90%). No que respeita a caracterização genotípica dos isolados de E. coli, os genes tet(A) e tet(B) detetaram-se em estirpes que apresentaram resistência à tetraciclina. Todas as estirpes codificavam genes para a produção de ESBL comprovando a resistência aos antibióticos β-lactâmicos em bactérias Gram-negativas. Neste estudo tivemos uma maior prevalência de blaCTXM (77%) em comparação com blaSHV e blaTEM, 10% e 37%, respetivamente. Em Enterococcus spp., todos os isolados que mostraram resistência à vancomicina, apresentam o genótipo vanA. Foram também detetados os genes tet(L), tet(K) e tet(M) em estirpes que mostraram resistência à tetraciclina. Vários estudos estão de acordo com os resultados obtidos neste trabalho. Uma estirpe de enterococos, E. durans, apresentou resistência à estreptomicina de alta carga, contendo o gene ant(6)-Ia. Na análise proteómica, via MALDI-TOF MS, para a deteção de massas proteicas associadas às diversas resistências, obtiveram-se vários picos estatisticamente significativos. Para os isolados de E. coli o antibiótico que demonstrou ter mais picos identificados foi o trimethoprim-sulfamethoxazole e para os isolados de ententerococos foi a eritromicina. Todos os dados obtidos foram analisados no software ClinProTools. O pico m/z 4428 ± 3 Da foi encontrado exclusivamente em isolados de enterococos enquanto que para E. coli, a massa m/z 4528,36 Da evidenciou-se como específica para esta espécie, podendo ser um potencial biomarcador para as respetivas estirpes. Em suma, o pico m/z 2943,29 Da para o antibiótico ampicilina, nas amostras de E. coli e os picos m/z 6358,27 Da e m/z 13237,3 Da para o antibiótico ciprofloxacina nos isolados de Enterococcus spp foram identificados como biomarcadores putativos para estes antibióticos. Estes resultados vêm reforçar a relevância da abordagem MALDI-TOF MS para a caracterização bacteriana clínica, tendo sido detetados picos de massa específicos dos dois géneros estudados e picos de massa caracterizadores das diferentes espécies do género enterococos e Escherichia coli.