Análise fitoquímica e atividade biológica de Cannabis ruderalis em modelos in vitro e baseados em células

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Pereira, Tamara Sofia Lima dos Santos Pinto
Data de Publicação: 2019
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
Texto Completo: http://hdl.handle.net/1822/66055
Resumo: Dissertação de mestrado em Bioquímica Aplicada (área de especialização em Biotecnologia)
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Cannabis ruderalis surge então como espécie representativa de cânhamo, recentemente descrita, que apresenta algumas características peculiares que a diferem marcadamente das outras variedades de canábis e que aumentam o interesse na exploração e caracterização do seu perfil fitoquímico. Assim, a presente investigação propõe-se a explorar a fração de metabolitos secundários solúveis em etanol e água e a atividade antioxidante in vitro e em modelos de levedura Saccharomyces cerevisiae, desta subespécie pouco relatada em literatura. Os resultados deste estudo sugerem que todos os extratos de C. ruderalis apresentam atividade antioxidante confirmada in vitro, pelos ensaios de DPPH e de sequestro de NO, sendo que o extrato etanólico a 50% (EE50%) demonstrou ser o extrato que apresenta maior atividade antioxidante e maior teor de fenólicos, o que levou à sua seleção para os ensaios in vivo, com Saccharomyces cerevisiae. Esta capacidade não pode ser atribuída a compostos específicos, pois a aplicação das técnicas de ESI-MS e ESI-MS/MS não foi suficiente para a identificação de todos os componentes das amostras. In vivo, através do ensaio Spot Assay, demonstrou-se que EE50% não é toxico às concentrações de 7,5; 75 e 1000 μg/mL, no entanto a incubação das células de S. cerevisiae com EE50% + H2O2 resultou numa diminuição acentuada da viabilidade, o que sugere um efeito potenciador do H2O2 pelo extrato em estudo. Por último, através de ensaios com estirpes de S. cerevisiae mutadas em yap1 e gpx1/2/3, verificou-se que EE50% é um possível candidato para ativar a resposta ao stress oxidativo, promovendo a expressão de enzimas envolvidas na defesa antioxidante. Em jeito de conclusão, EE50% demonstrou citotoxicidade quando incubado com H2O2, sendo sugerível que outras interações semelhantes possam decorrer com outros compostos em células humanas, sendo, portanto, emergente uma padronização e consistência dos constituintes químicos da planta, no sentido de apoiar a formulação de aplicações farmacológicas adequadas, de forma a diminuir os riscos associados ao consumo de produtos derivados de linhagens de Cannabis medicinal.Hemp is a highly versatile natural resource that can rise to other raw materials that include resistant fibers, highly nutritious seeds and a variety of phytochemicals with numerous associated pharmacological properties. Cannabis ruderalis emerges as a hemp representative species, recently described, that shows some peculiar characteristics that distinguish it from other varieties of cannabis, which increase the interest in its further phytochemical exploration and characterization. Thus, the current investigation proposes to explore the fraction of secondary ethanol and water soluble, as well as the antioxidant activity of this subspecies, by using the yeast Saccharomyces cerevisiae as a biological model. The results of this study suggested that all extracts of C. ruderalis show antioxidant activity, confirmed in vitro, through by the DPPH and NO scavenging assays. The 50% ethanolic extract (EE50%) revealed to be the one with the highest antioxidant activity and with the highest phenolic content, which lead to its selection for the in vivo assays, with Saccharomyces cerevisiae. This capacity can’t be attributed to specific compounds, once the application of the ESI-MS and ESI-MS/MS techniques wasn’t enough for the identification of all the components in the samples. Spot assay (in vivo experiments) revealed that EE50% isn’t toxic at 7,5; 75 and 1000 μg/mL, however, the incubation of the S. cerevisiae cells with EE50% + H2O2 resulted in a sharp decrease in viability, which suggests a potentialization effect of H2O2 by the extract analysed. Lastly, through spot assay with Saccharomyces cerevisiae strains mutated at yap1 and gpx1/2/3 genes, was verified that EE50% is a possible candidate to activate the response to the oxidative stress, promoting the expression of enzymes usually involved in in antioxidant defence. In conclusion, EE50% demonstrates cytotoxicity when incubated with H2O2, suggesting that other similar interactions may occur with other compounds in human cells, being emergent a standardization and consistency of plant chemical constituents to support the formulation of appropriate pharmacological applications in order to mitigate the risks associated with the use of products derived from medicinal cannabis strains.Oliveira, Rui Pedro Soares deUniversidade do MinhoPereira, Tamara Sofia Lima dos Santos Pinto20192019-01-01T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfhttp://hdl.handle.net/1822/66055por202474224info:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)instname:Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãoinstacron:RCAAP2023-07-21T12:43:35Zoai:repositorium.sdum.uminho.pt:1822/66055Portal AgregadorONGhttps://www.rcaap.pt/oai/openaireopendoar:71602024-03-19T19:41:05.311161Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos) - Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãofalse
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