Pesquisa e quantificação do transcrito BCR-ABL em amostras de sangue total, neutrófilos e células CD34+: sua relação com a resposta à terapêutica

• Autor(a) principal: Carvalho, Ana Raquel da Silva Gonçalves
• Data de Publicação: 2018
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10400.26/22718
• topic: Leucemia Mieloide Crónica; Inibidores das tirosina-quinases; Imatinib; Neutrófilos; CD34+; Ciências Médicas

Introdução: Atualmente, o tratamento da Leucemia mielóide crónica (LMC) baseia-se na utilização de inibidores tirosina-cinase que inibem a proteína oncogénica BCR-ABL. A avaliação da resposta à terapêutica é efetuada, de acordo com recomendações internacionais, através da monitorização da percentagem de transcritos BCR-ABL no sangue total. [23] Objetivos: Quantificar, num grupo de doentes com LMC, os níveis de transcritos BCR-ABL nas populações de neutrófilos e células CD34+ isoladas por cell-sorting e comparar com os resultados obtidos em amostras de sangue total. Material e métodos: Foram estudados 15 doentes com LMC, sob tratamento com imatinib, 6 do sexo feminino e 9 do sexo masculino. A média de idade ao diagnóstico foi de 56 anos (42-85 anos). As amostras utilizadas foram sangue total e populações de neutrófilos e células CD34+ separadas por cell-sorting. A pesquisa e quantificação dos transcritos BCR-ABL foram efetuadas por PCR Multiplex e PCR em Tempo Real Quantitativo (RQ-PCR), respetivamente. Resultados: Foram detetados transcritos BCR-ABL em 6 amostras de cDNA de sangue total. Nos neutrófilos e CD34+, apenas 2 amostras de cDNA apresentavam transcritos detetáveis. Observou-se uma ligeira correlação positiva entre o número de cópias de ABL no sangue total e neutrófilos. Não foram detetadas cópias de BCR-ABL em 6 amostras de neutrófilos e em 7 amostras de CD34+. Verificou-se uma correlação positiva estatisticamente significativa em relação ao número de cópias BCR-ABL para os valores de sangue total, neutrófilos e CD34+. A média de %BCR-ABL/ABL foi de 1,94% em sangue total, com 1 doente com uma %BCR-ABL/ABL>10%, 3 doentes entre 1-10%, 9 doentes <0,1% e num 1 doente não foi possível determinar a %BCR-ABL/ABL. Nos neutrófilos, a média de %BCR-ABL/ABL foi de 32,39%, 6 doentes apresentavam uma %BCR-ABL/ABL>10%, 2 doentes entre 1-10%, 1 doente <0,1% e em 6 doentes não foi possível determinar a %BCR-ABL/ABL. Nas células CD34+, a média de %BCR-ABL/ABL foi de 37,3625%, 5 doentes com %BCR-ABL/ABL>10%, 1 doente entre 1-10%, 2 doentes <0,1% e 7 doentes com %BCR-ABL/ABL indeterminadas. Ainda assim, observou-se uma correlação positiva entre os valores obtidos no sangue total e neutrófilos (p<0,0001, r=0,9412) e uma correlação ligeira entre os valores de neutrófilos e CD34+ (p=0,044, r=0,52). Globalmente, a %BCR-ABL/ABL determinada em sangue total foi inferior à obtida quando avaliada em neutrófilos e células CD34+. Discussão: Na quantificação do BCR-ABL, observou-se uma discrepância entre o número de cópias de ABL, sendo muito superiores nas amostras de sangue total. Estas diferenças podem ser justificadas por um rendimento significativamente inferior no processo de extração de RNA nas amostras obtidas após por separação celular, em comparação com as amostras preparadas a partir de sangue total. Em relação à %BCR-ABL/ABL, nas amostras de sangue total, os doentes com maior percentagem de transcritos nas amostras de sangue total são aqueles que apresentavam menor tempo de tratamento. Nas amostras de cell-sorting, em 8 doentes, a %BCR-ABL/ABL foi superior à obtida em sangue total. Em 3 amostras de células CD34+ e neutrófilos, de doentes com RM>4.0, verificou-se que a %BCR-ABL/ABL e o número de transcritos BCR-ABL apresentaram resultados superiores em relação às amostras de sangue total. Deste modo, revelaram-se resultados interessantes, no caso de estes doentes serem futuros candidatos a interromperem a terapêutica. Conclusão: A determinação da expressão de BCR-ABL em células CD34+ poderá ser um dado adicional importante para avaliar os doentes enquanto potenciais candidatos a paragem terapêutica. No entanto, serão necessários mais estudos para confirmar estes achados e avaliar qual a sua utilidade no diagnóstico e eventual estratégia terapêutica.