Desenvolvimento de linhas celulares produtoras de vectores retrovirais para terapia génica
Autor(a) principal: | |
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Data de Publicação: | 2010 |
Tipo de documento: | Dissertação |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos) |
Texto Completo: | http://hdl.handle.net/10362/10576 |
Resumo: | Dissertação apresentada na Faculdade de Ciências e Tecnologia da Universidade Nova de Lisboa para a obtenção do grau de Mestre em Biotecnologia |
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Desenvolvimento de linhas celulares produtoras de vectores retrovirais para terapia génicaVectores retroviraisTropismoSistema de recombinação de troca de cassetteDissertação apresentada na Faculdade de Ciências e Tecnologia da Universidade Nova de Lisboa para a obtenção do grau de Mestre em BiotecnologiaA terapia génica é uma tecnologia promissora para o tratamento de inúmeras doenças. Esta consiste na introdução de material genético nas células. Actualmente o método mais eficiente de transferência génica compreende a utilização de vectores virais, dos quais se destacam os vectores retrovirais que são uns dos mais utilizados em testes clínicos de terapia génica. Os vectores retrovirais permitem a estável integração do gene terapêutico no genoma celular garantindo assim um tratamento a longo prazo. Tradicionalmente a produção de um vector retroviral com determinado gene terapêutico requer o desenvolvimento integral de uma linha celular produtora destes vectores ou o desenvolvimento de uma linha celular produtora a partir de packaging cells lines. Ambos os casos requerem um extenso rastreio de clones de modo a seleccionar um com uma elevada produtividade viral, sendo este um processo laborioso, demorado e imprevisível em relação às produtividades virais a se obter. Uma estratégia recente que recorre à utilização de um sistema de recombinação de troca de cassette, permitiu o desenvolvimento de uma packaging cell line que serve de plataforma à produção de vectores retrovirais com diferentes genes terapêuticos. A produção de vectores retrovirais a partir da nova packaging cell line não requer a realização do rastreio referido, tendo sido eliminada a aleatoriedade inerente ao desenvolvimento de linhas celulares produtoras, o que se traduz numa redução de tempo e custos. Este trabalho contribuiu para o desenvolvimento de packaging cells lines produtoras de vectores retrovirais não replicativos com diferentes tropismos. Com este intuito, foram construídos três vectores de expressão com os genes env 4070A, Galv10A1 e 10A1 de modo a permitir o desenvolvimento de três linhas celulares independentes, cada uma produtora de vectores retrovirais com um determinado tropismo. Além disso, foram estabelecidas as condições de pressão selectiva e de transfecção mais adequadas a utilizar. Após transfecção e selecção foram obtidos vários clones produtores de partículas retrovirais infecciosas a partir das células transfectadas com os genes env 4070A e 10A1. Para os três clones com o gene env 4070A que apresentaram maior título viral foi determinar a taxa específica máxima de crescimento e de produtividade viral. Em paralelo, foi também desenvolvido um vector de expressão com um sistema de recombinação de troca de cassette para ser aplicado ao gene env de modo a estabelecer uma plataforma celular de produção de vectores retrovirais com diferentes tropismos.Faculdade de Ciências e TecnologiaCoroadinha, AnaRUNTomás, Hélio Antunes2013-10-15T14:57:49Z20102010-01-01T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfhttp://hdl.handle.net/10362/10576porinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)instname:Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãoinstacron:RCAAP2024-03-11T03:44:25Zoai:run.unl.pt:10362/10576Portal AgregadorONGhttps://www.rcaap.pt/oai/openaireopendoar:71602024-03-20T03:19:33.331259Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos) - Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãofalse |
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