Espiroquetídeos do complexo Borrelia burgdorferi s.l. e Leptospira spp: avaliação da atividade microbicida de macrófagos infetados

• Autor(a) principal: Silva, Carolina Santos Antunes da
• Data de Publicação: 2022
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10362/141301
• topic: Espiroquetas; Borrelia burgdorferi s.l.; Macrófagos; Fagolisossoma; ROS; Domínio/Área Científica::Engenharia e Tecnologia::Outras Engenharias e Tecnologias

Os macrófagos (MΦ) fagocitam e destroem agentes patogénicos através de diversos mecanismos, desempenhando um papel importante na resposta imune inata. A virulência de diferentes espécies de espiroquetas do complexo Borrelia burgdorferi s.l., e Leptospira spp, agentes da borreliose de Lyme e Leptospirose, respetivamente, podem influenciar os mecanismos bactericidas dos MΦ, levando a uma diversidade de manifestações clínicas. Este trabalho teve como objetivo, analisar os mecanismos microbicidas de MΦ na presença de espécies patogénicas de borrélias e leptospiras com diferentes níveis de patogenicidade, com enfoque na acidificação e maturação de fagossomas, e produção de espécies reativas de oxigénio (ROS) e azoto, e ureia. MΦ THP-1 e de sangue periférico foram infetados com as espécies B. garinii e B. lusitaniae, e L. biflexa e L. interrogans. A taxa de infeção foi calculada pela quantificação de MΦ com borrélias e leptospiras intracelulares por imunofluorescência. Por microscopia de fluorescência, ROS foi detetado com CM-H2DCFDA, vesículas acídicas com LysoTracker Red e lisossomas com anticorpo anti-LAMP-1. A concentração de nitritos e ureia foi medida por ensaios colorimétricos. Em T0, a taxa de MΦ infetados por B. garinii foi superior à de B. lusitaniae. B. garinii localizou-se maioritariamente no citoplasma mantendo a sua morfologia, enquanto B. lusitaniae dentro de vacúolos. Não se observou co-localização de borrélias e lisossomas. Após 24h de infeção, o número e tamanho de vesículas acídicas aumentou, especialmente com B. garinii. Ambas as bactérias induziram produção de ROS. Não houve diferenças na produção de nitritos e ureia. B. garinii apresentou uma maior infeciosidade, permanecendo livre no citoplasma da célula sem aparente formação de fagolisossomas. B. lusitaniae localizou-se dentro de fagossomas imaturos, demonstrando um possível mecanismo de sobrevivência. ROS, parece contribuir para a destruição intracelular das borrélias. Os ensaios com Leptospira spp foram igualmente realizados, tendo sido verificadas taxas de infeção elevadas