Pesquisa de biocompostos em Boletus edulis e Boletus pinophilus com ação anticancerígena

• Autor(a) principal: Alves, Maria Helena Araújo Portugal de Guichard
• Data de Publicação: 2014
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10348/7027
• topic: Cogumelos; Boletus; Biomoléculas; Glícidos; Melanina; Ácidos nucleicos; Ribose; ARN

Os cogumelos para além do seu valor gastronómico e nutricional são uma fonte de compostos com atividades biofuncionais reconhecidas desde há cerca de 5000 anos e confirmadas com testes in vitro e ensaios in vivo nas últimas duas gerações. Entre essas actividades biológicas destaca-se a atividade antitumoral e imunoestimulante cuja pesquisa se intensificou desde os anos 90. Estudos prévios demonstraram a existência de biopolímeros, extraídos com água quente, de um extrato de Boletus edulis com atividade anticancerígena, onde se destacava a fração,extraída, denominada BE3. O objetivo deste trabalho foi determinar a natureza química desta fração com elevado potencial anticancerígeno. Foi, também, objetivo desta pesquisa, verificar se outros cogumelos do mesmo género continham este biocomposto e em caso afirmativo testar o seu potencial anticancerígeno. Para tal utilizou-se como matéria-prima a película dos carpóforos dos cogumelos Boletus edulis e Boletus pinophillus. Os biopolímeros foram obtidos por tratamento do material com etanol a 80%, a quente, de forma a obter o resíduo insolúvel em álcool (AIR). O AIR foi fervido em água, concentrado e dializado (MWcut 12-14 kDa). A fracção BE3 e também a correspondente fração para Boletus pinophilus (BP3) foram isoladas por cromatografia de troca aniónica com eluição do material retido com solução aquosa de NaCl de 0,25 a 0,5M. Efetuou-se também a pesquisa de eumelaninas solúveis nos extratos de Boletus edulis e Boletus pinophilus, nas frações BE3 e BP3, não tendo sido detetadas quantidades significativas deste biopolímero. Para tal foi foi extraída a melanina da tinta de Sepia officinalis sofrendo clivagem oxidativa e identificados, de seguida, os monómeros, em HPLC.Para verificar a validade do método de clivagem oxidativa, em meio alcalino, da eumelanina em monómeros de PDCA e PTCA, testou-se no sistema cromatográfico a detecção e identificação de PDCA e PTCA da eumelanina da Sepia officinalis em HPLC. Os padrões puros de PDCA e PTCA que foram fornecidos por laboratório do Japão foram testados também no sistema cromatográfico. Fez-se a separação dos extratos HWBE e HWBP em diferentes frações (1,2,3,4,e5) por cromatografia de troca aniónica com eluição com solução de NaCl a concentrações crescentes. Pesquisou-se também o conteúdo qualitativo e quantitativo das amostras em monossacarídeos pela análise em HPLC, com prévia hidrólise ácida em: extrato inicial de BE e BP, HWBE e HWBP e de BE3 e BP3.Procedeu-se também a análise colorimétrica ácido fenólica de açúcares, em espectrofotometria, a 490nm. A análise quantitativa de açúcares foi feita, com recurso ao método da análise cromatográfica em HPLC,pelo método do padrão interno utilizando-se o cálculo de regressão linear dos mínimos quadrados. Todos estes métodos permitiram chegar ao teor quanto ao conteúdo (quantitativo e qualitativo) de monossacarídeos, dos extratos: inicial de BE e BP, de H WBE e HWBP e de BE3 e BP3. Verificou-se então que as frações BE3 e BP3, para além de baixo teor de açúcares já identificados em (Cardoso,2012),continham quantidades significativas de ribose, o que sugeria a presença de ARN. A pesquisa de ARN foi confirmada no nosso sistema cromatográfico pela deteção de um pico muito semelhante ao libertado pelo do padrão puro de ribose, (e não de padrão de desoxirribose), introduzido no HPLC.O espectro de ultravioleta visível obtido para estas frações foi um espetro típico de ácidos nucleicos: absorvância máxima a 260nm em UV-Vis. O tratamento destas frações com DNAse e a análise por eletroforese em gel de agarose com coloração de brometo de etídio, permitiu a identificação de uma banda para cada uma das amostras BE3 e BP3, inferior a 100 pares de bases, característica e identificativa de ácidos nucleicos. Também a anterior identificação de açúcar maioritário, nos extratos, como sendo a ribose e não a desoxirribose, aliado ao fato do tratamento destas frações com transcriptase reversa permitir a síntese do cDNA, confirmou a natureza de ARN nas amostras dos Boletus. No entanto na análise da atividade anticancerígena, avaliada pela inibição da proliferação celular HT29,a fração BP3 não apresentou uma atividade significativa no teste BRdU, contrariamente à fração isolada de Boletus edulis (BE3) e a de Boletus spretus (BS4) que registaram valores de eficácia da ordem dos 90% e 85%. Este facto sugere que para a atividade biológica do ARN destes Boletus, a composição e/ou a conformação da biomolécula serão determinantes para a sua atividade anticancerígena.