Micro-extração adsortiva aplicada na análise de esteróides anabólicos em contexto de controlo anti-doping

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Ahmad, Samir Marcos Esmail
Data de Publicação: 2013
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
Texto Completo: http://hdl.handle.net/10451/9445
Resumo: Tese de mestrado em Bioquímica, apresentada à Universidade de Lisboa, através da Faculdade de Ciências, 2013
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No entanto, face ao elevado tempo despendido, assim como à utilização de solventes orgânicos tóxicos, é necessário o desenvolvimento de métodos analíticos alternativos que permitam a diminuição do consumo de solventes e eliminação do passo de derivatização, mantendo ou melhorando o desempenho analítico. O presente trabalho consistiu no desenvolvimento, otimização, validação e aplicação de um método inovador, alicerçado na tecnologia de amostragem por flutuação, para a determinação de testosterona e epitestosterona em matrizes de urina. Por conseguinte, recorreu-se à técnica de micro-extração adsortiva em barra seguida de dessorção líquida e análise por cromatografia líquida de alta eficiência com deteção por rede de díodos (BAμE-LD/HPLC-DAD). Para otimização da metodologia desenvolvida, foram efetuados diversos estudos sistemáticos a vários parâmetros experimentais, tendo-se verificado que o co-polímero modificado à base de pirrolidona e divenilbenzeno (P1) demonstrava melhor seletividade comparativamente com outras fases. Em condições experimentais otimizadas (extração: 16 h (1000 rpm), pH 5,5; retro-extração: acetonitrilo (30 min), sob tratamento ultrassónico) foi possível obter recuperações médias de 92,1 e 93,4 % para testosterona e epitestosterona, respetivamente. O método revelou ainda, excelente linearidade (r2 > 0,9978) na gama compreendida entre 1,4 e 16,0 μg/L, tendo-se alcançado, para ambos os compostos, limites de deteção e de quantificação de 0,40 e 1,32 μg/L, respetivamente. O recurso ao método de adição padrão permitiu a aplicação da presente metodologia a amostras de urina, demonstrando bom desempenho analítico para a determinação dos compostos em estudo. A metodologia proposta (BAμE(P1)-LD/HPLC-DAD) revelou ainda ser uma estratégia alternativa para a análise de testosterona e epitestosterona como ferramenta para análise de rotina em contexto de controlo anti-doping, apresentando como principais vantagens a utilização de pequenas quantidades de amostra e solvente, tempo analítico reduzido e fácil manipulação, associada à rapidez, simplicidade e bom desempenho analítico.Testosterone is one of the most abused substances by athletes worldwide. In order to control its exogenous administration, the World Anti-Doping Agency (WADA) produced guidelines to proceed to its analysis, that combine an extraction followed by a derivatization step, which allows the analysis by gas chromatography coupled to mass spectrometry. However, in face of the long analytical process, as well as the usage of toxic organic solvents, it is necessary to develop alternative analytical methods that allow the diminishment of solvent consumption and elimination of the derivatization step, maintaining or improving the analytical performance. The present work consisted in the development, optimization, validation and application of a novel method, based on the “Floating Sampling Technology”, for the determination of testosterone and epitestosterone in urine matrices. Thus, bar adsorptive micro-extraction technique was used, followed by liquid desorption and analysis by high performance liquid chromatography with diode array detection (BAμE-LD/HPLCDAD). For optimization of the developed methodology, systematic studies have been performed to several experimental parameters, where the modified copolymer based on pyrrolidone and divenilbenzene (P1) presented better selectivity in comparison with other phases. Under optimized experimental conditions (extraction: 16 h (1000 rpm), pH 5.5; back-extraction: acetonitrile (30 min), under sonification), it was possible to obtain average efficiencies of 92.1 and 93.4 % for testosterone and epitestosterone, respectively. The method also revealed excellent linearity (r2 > 0.9978) in the range between 1.40 and 16.0 μg/L, having reached for both substances, limits of detection and quantification of 0.40 and 1.32 μg/L, respectively. The use of the standard addition method allowed the application of this methodology to urine samples, in which good analytical performance was achieved for the occurrence of the target compounds. The proposed method BAμE(P1)-LD/HPLCDAD proved to be a good alternative strategy for the analysis of testosterone and epitestosterone as a routine analytical tool in the context of anti-doping control, having as its main advantages the use of small amounts of sample and solvent, reduced analytical time and easy manipulation, associated with a fast, simple and good analytical performance.Nogueira, José Manuel Florêncio, 1965-Repositório da Universidade de LisboaAhmad, Samir Marcos Esmail2013-10-31T17:58:33Z20132013-01-01T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfhttp://hdl.handle.net/10451/9445TID:201281775porinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)instname:Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãoinstacron:RCAAP2023-11-08T15:53:53Zoai:repositorio.ul.pt:10451/9445Portal AgregadorONGhttps://www.rcaap.pt/oai/openaireopendoar:71602024-03-19T21:33:39.704887Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos) - Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãofalse
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