Nanosistema de entrega de fármacos para o tratamento de infeções por HPV

• Main Author: Antunes, Francisca Ferreira
• Publication Date: 2018
• Format: Master thesis
• Language: por
• Source: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Download full: http://hdl.handle.net/10400.6/9994
• topic: At11-B0; Cancro do Colo do Útero; Derivados do As1411; G-Quadruplex; Ligandos; Nanosistema; Domínio/Área Científica::Ciências Médicas::Ciências Biomédicas

O AS1411 é uma sequência de oligonucleótidos rica em guaninas e altamente polimórfica, apresentando uma ampla variedade de estruturas de G-quadruplex (G4). Este aptamero é seletivo para a nucleolina (NCL), uma proteína sobre-expressa em muitas células cancerosas e que se apresenta como um potencial alvo terapêutico. Devido à ligação à NCL, o aptamero G4 AS1411 pode ser internalizado por estas células. Embora o G4 AS1411 apresente um perfil de segurança e capacidade de induzir respostas em alguns pacientes, é importante melhorar a sua farmacologia e potência, de forma a proporcionar uma melhor eficácia. Deste modo, novos derivados do G4 AS1411, como o G4 AT11-B0, foram desenvolvidos. O uso de aptameros derivados do G4 AS1411 para fins terapêuticos requer a sua estabilização através da presença de ligandos. Macrociclos derivados de fenantrolina, como o [32]phen2N4 e [16]phenN2, e derivados de laranja de acridina, como o C8, C8-NH2, C5 e C3, são apresentados como potenciais ligandos do G4 AT11-B0. O objetivo deste trabalho é desenvolver nanosistemas conjugados G4 AT11-B0-ligandos e avaliar os seus efeitos in vitro na linha celular do cancro do colo do útero (HeLa) versus fibroblastos dérmicos humanos normais (NHDF). Estudos de estabilização e afinidade dos ligandos em relação ao G4 AT11-B0 foram realizados por espectroscopia de dicroísmo circular e de fluorescência. Os resultados revelaram alta afinidade e estabilização térmica dos ligandos [32]phen2N4 (KD = 2,1 x 10-7 M-1 ) e C8 (?Tm = 44,5 oC), respetivamente, em relação ao G4 AT11-B0. Os conjugados, os ligandos e o G4 AT11-B0 foram incubados em células HeLa e NHDF e posteriormente fez-se uma avaliação da citotoxicidade celular através do ensaio de MTT. Os conjugados G4 AT11-B0-C3 e G4 AT11-B0-C5 apresentaram as menores percentagens de viabilidade celular, 17 % e 10,7 %, respetivamente, nas células HeLa. No ensaio de microscopia de fluorescência confocal observou-se a internalização celular do conjugado G4 AT11-B0-C8. O presente trabalho relata a importância do uso de nanosistemas conjugados formados por derivados do G4 AS1411 e ligandos como agentes anticancerígenos, inibindo a proliferação de células cancerosas, com danos mínimos nas células saudáveis.