Metabolitos alvo da urina com potencial impacto na compreensão da asma

• Autor(a) principal: Marques, Jéssica Eufémia Pereira
• Data de Publicação: 2017
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10773/22703
• topic: Bioquímica; Asma - Fisiopatologia; Metabolitos; Urina - Análise química; Cromatografia gasosa; Espectrometria de massa

A asma é uma doença inflamatória, crónica e heterogénea, das vias respiratórias, com elevado impato socioeconómico e crescente incidência e prevalência. O principal objetivo desta tese foi a implementação de uma metodologia que permita a análise simultânea do perfil metabólico urinário de famílias químicas com potencial relevância na compreensão da asma, nomeadamente aminoácidos, ácidos orgânicos, ácidos gordos e açúcares. Primeiramente procedeu-se à implementação da metodologia, testando diferentes condições de sililação, seguido de análise por GC-qMS (cromatografia em fase gasosa - espectrometria de massa com quadrupolo). Foram analisadas amostras de urina recolhidas em contexto hospitalar, incluindo 37 indivíduos asmáticos, 19 com diversas alergias e 17 saudáveis, usados como controlo. O grupo de indivíduos com asma e alergias era constituído por 34 mulheres e 22 homens, dos 3 os 79 anos de idade, e em que 59% tomava medicação e 36% tinha co-patologias associadas. Inicialmente, as amostras de urina foram caracterizadas relativamente à condutividade e teor de creatinina. Verificou-se uma grande dispersão dos resultados dentro de cada grupo, com valor mediano de 11±6 mS/cm nos controlos e 17±4 mS/cm nos indivíduos asmáticos para a condutividade, e 612±195 μg/mL nos controlos e 842±211 μg/mL nos indivíduos asmáticos para a creatinina, demonstrando que ambos os parâmetros são estatisticamente diferentes entre grupos. De seguida, foram identificados 35 metabolitos pertencentes às famílias químicas alvo: 4 aminoácidos, 6 ácidos orgânicos, 2 ácidos gordos e 23 açúcares. Com o objetivo de comparar diferentes abordagens de normalização, as concentrações dos metabolitos (expressas em equivalentes de padrão interno) foram normalizadas pelos respetivos valores de condutividade e teor de creatinina. No entanto, estas abordagens não permitiram incrementar o número de metabolitos diferenciadores entre os grupos. Assim, a concentração dos metabolitos alvo, expressa em equivalentes de padrão interno, foi a estratégia selecionada para uma melhor identificação de alterações estatisticamente significativas entre os grupos objeto de estudo. Efetuou-se uma análise estatística a uma matriz que incluiu todas as idades (3 aos 79 anos), tendo-se observado significância estatística em 19 metabolitos (3 aminoácidos, 6 ácidos orgânicos e 10 açúcares). Para minimizar a influência de potenciais fatores de confusão, nomeadamente a idade, realizou-se um estudo focado nos indivíduos de 10 a 30 anos (19 mulheres e 16 homens, 59% tomava medicação e 20% tinha co-patologias). Ao estudar uma população alvo menor, a distinção entre as amostras aumentou, sendo que se obtiveram 28 metabolitos (4 aminoácidos, 6 ácidos orgânicos, 2 ácidos gordos e 16 açúcares) estatisticamente diferentes entre os grupos objeto de estudo. Assim, mais 9 metabolitos (L-5-oxoprolina, ácido hexadecanóico, ácido octadecanóico, treitol, ribose, frutose, manitol, sorbose e galactose) permitem fazer a distinção entre os grupos. Apesar da dispersão observada nos valores dentro de cada grupo, que pode ser explicada pela heterogeneidade da doença, nomeadamente a existência de vários fenótipos e endótipos dentro da asma, foi possível identificar um conjunto de metabolitos nos quais se observaram diferenças estatisticamente significativas. Estes metabolitos estão associados a fenómenos de stress oxidativo, relacionando o metabolismo dos aminoácidos, metabolismo lipídico, metabolismo energético e metabolismo dos hidratos de carbono de forma integrada.